ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理：用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或者標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗體、HRP標(biāo)記的親和素，經(jīng)過(guò)徹底洗滌后用底物顯色。底物在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品濃度呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定OD值，計(jì)算樣品濃度。

二、樣品類(lèi)型：

　標(biāo)本必須為液體，不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血漿。每個(gè)標(biāo)本量收集體積＝100ul×檢測(cè)種類(lèi)。取材前須向銷(xiāo)售人員索要說(shuō)明書(shū)。

樣品采集：

　收集標(biāo)本前必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定。對(duì)收集后當(dāng)天進(jìn)行檢測(cè)的標(biāo)本，儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆�，如有特殊原因需要周期收集�?biāo)本，

　將標(biāo)本及時(shí)分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反復(fù)凍融。標(biāo)本2-8℃可保存48小時(shí)，-20℃可保存1個(gè)月。-70度可保存6個(gè)月。

三、人非神經(jīng)元性烯醇化酶(NNE)ELISA試劑盒技術(shù)流程

雙抗體夾心法(檢測(cè)未知抗原)

間接法(檢測(cè)未知抗體)

1、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃ 過(guò)夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次。
2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌(同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔)。
3、加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.05ml。37℃ 孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。
4、加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
5、終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml
6、結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性。

1、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1-10ug/ml，每孔加0.1ml，4℃過(guò)夜。次日洗滌3次。
2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌。(同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照)
3、加酶標(biāo)抗體：于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.05ml，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,后一遍用DDW洗滌。
4、加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
5、終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml
6、結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性。

四、客戶(hù)須知

1仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)

　　2確定試劑盒在有效期內(nèi)

　　3按說(shuō)明書(shū)確定所有試劑齊全(數(shù)量、體積)

　　4標(biāo)本制備要規(guī)范，每份標(biāo)本體積要按2-3個(gè)復(fù)孔以上的量制備(貯存)，盡量分裝做備份。短期內(nèi)無(wú)法實(shí)驗(yàn)者，注意低溫保存

　　5準(zhǔn)備好所有實(shí)驗(yàn)額外所需物品，如試管、吸頭、移液器、離心機(jī)等

　　6根據(jù)檢測(cè)標(biāo)本數(shù)量確定所需試劑的量

　　7按說(shuō)明書(shū)將所用試劑平衡至室溫，配制所需試劑

五、報(bào)告內(nèi)容及標(biāo)準(zhǔn)

1、ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)；

2、詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)步驟；

3、完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（試劑耗材，實(shí)驗(yàn)方法，實(shí)驗(yàn)結(jié)果及結(jié)果說(shuō)明）；

4、實(shí)驗(yàn)進(jìn)行階段，我公司客服人員會(huì)及時(shí)向您匯報(bào)實(shí)驗(yàn)進(jìn)程。

不斷提升服務(wù)質(zhì)量，精益求精，“真誠(chéng)的服務(wù)”是我司永恒的主題。

六、標(biāo)本處理

1、只對(duì)試劑盒本身負(fù)責(zé)，不對(duì)因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負(fù)責(zé)，請(qǐng)使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量，預(yù)留充足的樣本。

2、實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)標(biāo)本含量，如果標(biāo)本濃度過(guò)高，應(yīng)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行稀釋?zhuān)瓜♂尯蟮臉?biāo)本符合試劑盒的檢測(cè)范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

3、若所檢樣本不包含在說(shuō)明書(shū)所列樣本之中，建議進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其有效性，并注意留存樣本。

4、使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細(xì)胞提取液可能會(huì)由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致 ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。

5、若樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清，因該類(lèi)樣本干擾因素較多，如：細(xì)胞狀態(tài)、細(xì)胞數(shù)量、采樣時(shí)間等，所以可能存在檢測(cè)不出的情況。

6、某些天然蛋白或重組蛋白，包括原核及真核重組蛋白，可能因?yàn)榕c本產(chǎn)品所使用的檢測(cè)抗體及捕獲抗體不匹配，而不被檢測(cè)出。

7、建議使用新鮮樣本，保存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能會(huì)存在蛋白降解或變性導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。

溫馨提示：由于關(guān)稅及產(chǎn)品促銷(xiāo)活動(dòng)性，請(qǐng)來(lái)電咨詢(xún)具體產(chǎn)品折扣。

七、產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)

1、簡(jiǎn)便快捷：450nm酶標(biāo)儀檢測(cè)，包含Elisa所需全部試劑和詳細(xì)操作說(shuō)明，全部現(xiàn)貨。
2、品質(zhì)卓越：原料精選國(guó)際知名品牌，經(jīng)嚴(yán)格甄選，保障各批次批間穩(wěn)定性和可重復(fù)性。
3、權(quán)威認(rèn)可：已有超過(guò)380篇SCI文獻(xiàn)引用，兩次登上頂級(jí)期刊Nature。
4、品種齊全：提供近200種常用試劑盒，能檢測(cè)人、大鼠、小鼠、猴和牛等多種屬。
5、暢銷(xiāo)全球：出口到歐美市場(chǎng)，受到全球科學(xué)家的關(guān)注。
6、使用廣泛：客戶(hù)遍及全國(guó)各地，包括中科院、北京生命科學(xué)研究院、北京大學(xué)、清華大學(xué)、復(fù)旦大學(xué)、華西醫(yī)科大學(xué)、北京師范大學(xué)、華中科技大學(xué)等著名高校及研究機(jī)構(gòu)。