樣品采集：收集標(biāo)本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當(dāng)天進(jìn)行檢測的標(biāo)本，儲存在4℃?zhèn)溆�，如有特殊原因需要周期收集�?biāo)本，將標(biāo)本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反復(fù)凍融。標(biāo)本2-8℃可保存48小時，-20℃可保存1個月。-70℃可保存6個月。部分激素類標(biāo)本需添加抑肽酶。

【產(chǎn)品保質(zhì)期】：半年(六個月)

二、實(shí)驗(yàn)原理：

結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體與受檢標(biāo)本（抗原或抗體）起反應(yīng)。用洗滌的方法洗去未結(jié)合的抗原或抗體。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。根據(jù)實(shí)際的應(yīng)用方法，可以分成以下幾種：

雙抗夾心 ELISA：將捕獲抗體包被在固相載體上，封閉后加入待檢抗原，溫育后加入酶標(biāo)檢測抗體，捕獲抗體和檢測抗體可以是針對不同表位的兩種單抗，也可以是針對同一抗原的一種單抗與一種多抗，但是檢測抗體需要經(jīng)過酶標(biāo)。

競爭ELISA：用待檢抗原或抗體去干擾已經(jīng)預(yù)先設(shè)計好的體系，終顯色的結(jié)果與待檢抗原或抗體的干擾程度成負(fù)相關(guān)。主要應(yīng)用于只有一個抗原表位的蛋白檢測。

多因子ELISA檢測技術(shù)：多重ELISA芯片技術(shù)通過在96孔板的每個孔中以陣列的形式植入1~25種捕獲抗體，隨后像ELISA一樣操作，通過化學(xué)發(fā)光(HRP酶)和熒光燃料(紅外)來檢測。

受刺激的細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子是短暫的，并且不同細(xì)胞因子基因表達(dá)的動力學(xué)是變化的。通過ELISA實(shí)驗(yàn)只能檢測到的免疫反應(yīng)性的細(xì)胞因子蛋白的含量，而這并不能完全代表細(xì)胞因子的生物活性的水平。例如，使用抗細(xì)胞因子抗體的一種ELISA不能區(qū)別如TGF-β1的細(xì)胞因子蛋白是無活性的前體形式還是有活性的成熟蛋白。此外，一種ELISA可以檢測部分降解的細(xì)胞因子蛋白，它們?nèi)杂忻庖叻磻?yīng)性（例如至少可識別兩個表位），當(dāng)時它可能卻喪失了它們的生物學(xué)活性。

三、樣本處理及要求：

1. 血清：室溫血液自然凝固 10-20 分鐘，離心 20分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。

2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合 10-20 分鐘后，離心20 分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成應(yīng)該再次離心。

3. 尿液：用無菌管收集，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時，用 PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到 100 萬/ml 左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心 20 分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的 PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆�。�?biāo)本融化后仍然保持 2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心 20 分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

四、人脾臟酪氨酸激酶(Syk)ELISA試劑盒優(yōu)點(diǎn)：

◆精心挑選的抗體對、標(biāo)準(zhǔn)品、顯色劑和酶標(biāo)板全部為進(jìn)口產(chǎn)品實(shí)現(xiàn)佳性能；

◆原材料批量進(jìn)口加上自配的特殊配方稀釋劑保證高品質(zhì)產(chǎn)品性能的同時兼顧成本；

◆采用先進(jìn)專利技術(shù)，嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn)方案組裝生產(chǎn)；

◆預(yù)包被微孔板的批內(nèi)和批間變異系數(shù)均小于10 ％；

◆經(jīng)過嚴(yán)格交叉反應(yīng)和干擾測試及穩(wěn)定性試驗(yàn)；

◆明確的敏感度；

◆針對所有樣品類型達(dá)到佳的性能；

◆廣泛的檢測范圍可以滿足大多數(shù)檢測要求；

◆完善的售后服務(wù)和免費(fèi)的技術(shù)支持免去您的后顧之憂；

◆強(qiáng)大的生產(chǎn)能力和充足的儲備、操作熟練的技術(shù)人員及高效的生產(chǎn)流程，隨時可以組裝出您定制的產(chǎn)品。僅供實(shí)驗(yàn)大鼠、小鼠、兔等實(shí)驗(yàn)動物標(biāo)本檢測使用！

五、常見問題解答

1.　正式試驗(yàn)時，應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗(yàn)條件，待檢樣品應(yīng)作一式二份，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時本底較高，說明有非特異性反應(yīng)，可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。

2.　在ELISA中，進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的，其中包括:

　(1)　固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被，在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。

（2) 包被抗體(或抗原)的選擇：將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg／ml等)進(jìn)行包被后，在其它試驗(yàn)條件相同時，觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值大而蛋白量少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1～10μg／ml。

(3)　酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價的滴定(見酶標(biāo)記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。

　(4)　酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用，應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后，應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入。

六、使用指南

步驟	常見問題	解決方案
實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備	1 加樣器不準(zhǔn)確；尤其10ul以下的加樣器，對結(jié)果影響極大； 2 保溫設(shè)備不良； 3 洗滌用水不規(guī)范。	1 校正加樣器；10ul以下加樣器好采用進(jìn)口產(chǎn)品（芬蘭、法國等）； 2 仔細(xì)校正溫度到37℃，水浴箱為佳； 3 必須使用去離子水或蒸餾水，不得用自來水、礦泉水等。 4 認(rèn)真閱讀使用說明書。
樣品加樣	1 加樣不準(zhǔn)確； 2 沒有混勻。	1 加樣時一定要仔細(xì)。加樣后，再檢查，以防漏加、錯加。 2 加樣后，反復(fù)抽吸3次混勻，防止血清聚集孔底，導(dǎo)致非特異性吸附。
洗滌	洗滌不徹底	1 每次注水洗滌，應(yīng)靜止30秒鐘； 2 選用吸水紙作為襯墊，每次洗滌后扣干孔內(nèi)水分； 3 可選用塑料洗滌瓶。
加酶反應(yīng)	漏加	滴加后，認(rèn)真檢查各孔
試劑保存	保存不規(guī)范	一定要在2-8℃存放。不得過高，也不得凍存（凍存后，酶液將失效）。
對照品	對照品為凍干品	按對照管標(biāo)示，加入相應(yīng)體積的去離子水或蒸餾水復(fù)溶，充分溶解混勻�？砂凑f明書使用。

七、訂購流程

1.絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨，一般情況下都能訂貨當(dāng)日發(fā)貨。

2.部分非常用產(chǎn)品，需提前1－2日預(yù)訂，海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂。

3.部分產(chǎn)品價格會因貨期、批次等因素發(fā)生變化，若有變動以訂貨當(dāng)日新價格為準(zhǔn)。

八、代測服務(wù)

服務(wù)項(xiàng)目	內(nèi)容說明	提交結(jié)果	周期
間接法ELISA檢測	客戶提供檢測材料	檢測試驗(yàn)報告	1周
夾心法ELISA檢測	客戶提供檢測材料和檢測試劑盒	檢測試驗(yàn)報告	1周
競爭法ELISA檢測	客戶提供檢測材料和檢測試劑盒	檢測試驗(yàn)報告	2周