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1.稱(chēng)量:根據(jù)用量按比例依次稱(chēng)取成分,牛肉膏常用玻棒挑取,放在小燒杯或表面皿中稱(chēng)量,用熱水溶化后倒入燒杯,蛋白胨易吸濕,稱(chēng)量時(shí)要迅速。
2.溶解:在燒杯中加入少于所需要的水量,加熱,ZHU一加入各成分,使其溶解,瓊脂在溶液煮沸后加入,融化過(guò)程需不斷攪拌。加熱時(shí)應(yīng)注意火力,勿使培養(yǎng)基燒焦或溢出。溶好后,補(bǔ)足所需水分。
3.調(diào)PH:用1mol/L NaOH或1mol/L HCl把PH調(diào)至所需范圍。
4.過(guò)濾:趁熱用濾紙或多層紗布過(guò)濾,以利于某些實(shí)驗(yàn)結(jié)果的觀察,如無(wú)特殊要求時(shí)可省去此步驟。
5.分裝:按實(shí)驗(yàn)要求,可將配制的培養(yǎng)基分裝入試管內(nèi)或三解瓶?jī)?nèi);分裝時(shí)注意,勿使培養(yǎng)基沾染在容器口上,以免沾染棉塞引起污染。
① 液體分裝:分裝高度以試管高度的1/4左右為宜,分裝三角瓶的量則根據(jù)需要而定,一般以不超過(guò)三角瓶容積的1/2為宜。
② 固體分裝:分裝試管,其裝量不超過(guò)管高的1/5,滅菌后制成斜面,斜面長(zhǎng)度不超過(guò)管長(zhǎng)的1/2。分裝三解瓶,以不超過(guò)容積的1/2為宜。
③ 半固體分裝:裝置以試管高度的1/3為宜,滅菌后垂直待凝。
6.加棉塞:分裝完畢后,在試管口或三解瓶口塞上棉塞或泡沫塑料塞及試管帽等,以阻止外界微生物進(jìn)入培養(yǎng)基而造成污染,并保證有良好的通氣性能。
7.包扎:棉塞頭上包一層牛皮紙,扎緊,即可進(jìn)行滅菌。
8.保存:滅菌后的培養(yǎng)基放入37℃養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí),以檢驗(yàn)滅菌的效果,無(wú)污染方可使用。
制備目的:學(xué)習(xí)制備培養(yǎng)基的基本技術(shù)。
所需試劑:牛肉膏,蛋白胨、NaCl、瓊脂、1mol/L NaOH、1mol/L HCl。
其它材料:試管,三角燒瓶,燒杯,量筒,漏斗,乳膠管,彈簧夾,紗布,棉花,牛皮紙,線繩,pH試紙,電爐,臺(tái)稱(chēng)。
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