ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)是一種敏感性高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果判斷較客觀等因素，已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中。看似簡(jiǎn)單的Elisa試劑盒操作實(shí)驗(yàn)中，有著一些關(guān)鍵重點(diǎn)需要大家了解及掌握。在今天的文章內(nèi)容，上海恒遠(yuǎn)生物的技術(shù)人員為您講解實(shí)驗(yàn)重點(diǎn)：
一、檢測(cè)試劑要適量
切勿使用過(guò)多的檢測(cè)試劑。如果濃度過(guò)高，或者未正確稀釋?zhuān)瑒t會(huì)導(dǎo)致高背景。也不要顯色過(guò)度，如有必要，優(yōu)化一下何時(shí)應(yīng)加入終止液。如果您的ELISA試劑盒不幸地遇到了高背景，那么也無(wú)需太擔(dān)心，依次查看ELISA系統(tǒng)中的組分，并排除可能存在的問(wèn)題。悉心優(yōu)化，相信很快就會(huì)有漂亮的結(jié)果。
二、洗滌很重要
如果未結(jié)合的材料殘留在微孔板中，那么它會(huì)增加背景噪音。有必要的話，可增加洗滌液中的鹽濃度，這會(huì)阻止非特異結(jié)合反應(yīng)。如果背景過(guò)高，而您懷疑洗滌不夠時(shí)，可以嘗試增加洗滌次數(shù)。
三、關(guān)鍵的封閉
封閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占據(jù)微孔板中潛在的結(jié)合位點(diǎn)。這就降低了可產(chǎn)生信號(hào)的抗體非特異結(jié)合的機(jī)會(huì)。您當(dāng)然也希望抗體只與目的蛋白結(jié)合吧。如果您的背景過(guò)高，懷疑封閉不充分，那么您可以嘗試使用更高濃度的封閉液，或適當(dāng)延長(zhǎng)封閉時(shí)間。
如果您一直被背景問(wèn)題所困擾，那么也許您該花些時(shí)間來(lái)優(yōu)化封閉液。這可能需要時(shí)間，但也是值得的。目前主要有兩種類(lèi)型的封閉液：蛋白和非離子型去污劑。您使用的類(lèi)型須取決于多個(gè)因素，包括微孔板的表面試劑、吸附的抗原、您的抗體和檢測(cè)試劑。好的封閉液應(yīng)降低非特異性結(jié)合，但它不應(yīng)當(dāng)與抗原、抗體或檢測(cè)試劑發(fā)生相互作用。
最常用的非離子型去污劑是Tween-20(上海恒遠(yuǎn)生物公司的Tween-20 吐溫-20 新貨已經(jīng)上市啦，需要的來(lái)電咨詢(xún)哦！)。這種封閉液便宜、穩(wěn)定，在去除洗滌過(guò)程中的一些非特異結(jié)合上很有用。但它們只在存在時(shí)起作用，因?yàn)楹苋菀妆幌吹�。因此所有洗滌液中也必須添加封閉液。請(qǐng)勿使用高濃度，它會(huì)降低特異結(jié)合，產(chǎn)生假陰性。另一個(gè)選擇是使用蛋白和非離子型去污劑這兩種封閉液，后者可協(xié)助洗滌過(guò)程中的封閉。
蛋白封閉液則有所不同，是永久的。它們與開(kāi)放位點(diǎn)結(jié)合并封閉，同時(shí)穩(wěn)定與微孔板結(jié)合的抗原分子。常用的蛋白封閉液包括牛血清白蛋白(BSA)、脫脂奶粉、正常血清和魚(yú)明膠。血清組分的內(nèi)在多樣性可使它有效攔截許多不同類(lèi)型的分子相互作用。不過(guò)，它的缺點(diǎn)在于能與Protein A和IgG抗體相互作用。解決這個(gè)問(wèn)題的一種方法是使用雞或魚(yú)的正常血清。
四、抗體濃度須優(yōu)化
如果試劑稍有不同，則可能需要優(yōu)化抗體的量。非特異的抗體結(jié)合會(huì)增加背景。為了防止這一點(diǎn)，切勿使用過(guò)多的一抗或二抗。
以上內(nèi)容就是恒遠(yuǎn)技術(shù)人員為您總結(jié)的ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)的重點(diǎn)，希望能夠給您的實(shí)驗(yàn)帶來(lái)幫助。如有疑問(wèn)，歡迎廣大用戶來(lái)電咨詢(xún)，我們將本著 “專(zhuān)注品質(zhì)、信守承諾、積極溝通、創(chuàng)新服務(wù)”的精神，熱誠(chéng)為每一位客戶提供最優(yōu)質(zhì)的服務(wù)！
