Western Blot實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
一、概述
Western Blot是利用抗原抗體的免疫反應(yīng),先將蛋白通過(guò)SDS-PAGE凝膠電泳分離開(kāi),再利用電場(chǎng)力的作用將膠上的蛋白轉(zhuǎn)移到固相載體上,然后再加上抗體形成抗原抗體復(fù)合物,再利用發(fā)光或顯色的原理將結(jié)果顯示到膜或者底片上。
SDS-PAGE電泳的高分辨率以及固相免疫測(cè)定的特異性和敏感性保證了最終實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。WB是半定量實(shí)驗(yàn),相比較于定性實(shí)驗(yàn)有數(shù)據(jù)分析,但是需要嚴(yán)格的參照標(biāo)準(zhǔn),因此不是準(zhǔn)確的數(shù)量關(guān)系,這也是與定量試驗(yàn)的不同之處。
二、技術(shù)流程
1.根據(jù)目標(biāo)蛋白在細(xì)胞中的位置(細(xì)胞核中,細(xì)胞漿中,細(xì)胞膜上)和目標(biāo)蛋白的性質(zhì)(變性以及非變性)選擇合適的提取蛋白的方法
2.用合適的方法例如Bradford或者BCA法測(cè)定蛋白含量
3.根據(jù)目標(biāo)蛋白的大小制作合適濃度的SDS凝膠
4.根據(jù)目標(biāo)蛋白的大小選擇合適的電泳電壓以及電泳時(shí)間
5.根據(jù)目標(biāo)蛋白的大小以及剪切的凝膠的大小選擇合適的轉(zhuǎn)膜電流以及轉(zhuǎn)膜時(shí)間
6.根據(jù)目標(biāo)蛋白的性質(zhì)選擇合適的封閉方法,例如脫脂奶粉,BSA等方法封閉
7.選擇合適濃度的一抗進(jìn)行孵育,洗膜
8.選擇合適濃度的二抗進(jìn)行孵育,洗膜
9.ECL發(fā)光液進(jìn)行曝光
三、客戶須知
1、 檢測(cè)樣本:新鮮的組織或者細(xì)胞
2、 樣本量:檢測(cè)細(xì)胞樣本的一個(gè)指標(biāo)的最低細(xì)胞含量是1*106,檢測(cè)組織樣本的一個(gè)指標(biāo)的最低組織樣品為30mg(建議多提供樣本,便于研磨)
3、樣本保存:
(1)新鮮的組織樣本:迅速凍存。
(2)懸浮細(xì)胞:收集完以后,冷的PBS洗3遍,吸凈殘余的液體,冷凍保存。
(3)貼壁細(xì)胞:吸凈培養(yǎng)基以后,預(yù)熱的PBS洗3遍,胰酶收集,再用冷的PBS洗3遍,吸凈殘余液體,冷凍保存;對(duì)于不適合用胰酶收集的細(xì)胞(例如胰酶處理會(huì)消化掉一部分蛋白或者對(duì)于目標(biāo)蛋白有刺激作用),預(yù)熱的PBS洗3遍以后,用細(xì)胞刮收集細(xì)胞,吸凈殘余的液體,冷凍保存。
4、請(qǐng)?zhí)崆案嬖V我們:您樣本的種屬(人、大鼠、小鼠、兔、豬等)、樣本數(shù)量、待測(cè)指標(biāo)。
5、樣本郵寄:放入冰袋或者干冰及時(shí)寄送,建議選擇順豐快遞陸運(yùn)或者中通快遞陸運(yùn)。
四、報(bào)告內(nèi)容及標(biāo)準(zhǔn)
1 目的蛋白曝光照片一張
2 電子版目的蛋白和內(nèi)參的照片
3 灰度分析數(shù)據(jù)一份
4 蛋白含量數(shù)據(jù)
5 完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告(試驗(yàn)方法,試驗(yàn)參數(shù),實(shí)驗(yàn)儀器參數(shù))
五、收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)及服務(wù)周期
收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)及服務(wù)周期因根據(jù)客戶提供的樣品不同而有所改變,詳細(xì)請(qǐng)跟客服專員聯(lián)系或參考所簽署的合作合同。
六、質(zhì)量保證
良好的實(shí)驗(yàn)平臺(tái)體系,先進(jìn)的儀器設(shè)備以及從事WB實(shí)驗(yàn)多年的優(yōu)質(zhì)服務(wù)團(tuán)隊(duì)為您最終滿意的實(shí)驗(yàn)結(jié)果保駕護(hù)航。
七、售后服務(wù)
本公司會(huì)不定期進(jìn)行顧客回訪,以提高我們的服務(wù)質(zhì)量。本條款以所簽訂的合作合同為依據(jù),詳情會(huì)因合同內(nèi)容的不同而有所差異。
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