近日,我司技術(shù)部反應(yīng),有不少客戶在ELISA試劑盒洗滌步驟中容易出錯,從而導(dǎo)致對實驗結(jié)果的影響。恒遠(yuǎn)生物技術(shù)員根據(jù)自身多年經(jīng)驗分析ELISA洗滌,在這里分享給各位朋友們!希望能夠給您的實驗帶來幫助。
洗滌步驟可降低未結(jié)合抗體所引起的背景信號,從而增加分析的信噪比。每一步之間的洗滌確保只有特異的結(jié)合事件被保留,在最后一步產(chǎn)生信號。而不充分的洗滌會導(dǎo)致差異和高背景,從而帶來不理想的結(jié)果。本文將為你介紹一些利用自動洗板機(jī)來洗滌Elisa平板的技巧。
第二個影響洗滌效果的主要參數(shù)是洗滌循環(huán)的量。當(dāng)然,洗滌次數(shù)越多,背景越低。然而,太多次的洗滌會降低信號強(qiáng)度,使其難以測定。通常的做法是在每次抗體或抗原孵育后重復(fù)洗滌三次。不過,Elisa板的制造商會對洗滌次數(shù)提出建議。一般而言,制造商包被平板需要的洗滌次數(shù)比用戶包被的平板要少。對于用戶包被的Elisa板,必須優(yōu)化洗滌次數(shù)。
控制洗滌量和洗滌次數(shù)的另一種方法是加入過量的洗滌液。一般來說,96孔板的每個孔能容納330至460μl。不過,有些自動化洗板機(jī)可設(shè)置程序,分配遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出這個量的洗滌液,比如1ml。它是如何做到的呢?其實很簡單,就是在分液的同時打開吸液功能。換句話說,隨著分液器分配更多的液體,抽吸器也將液體吸出。這種技術(shù)能增加洗滌量,但不會溢出到其他孔中。
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