第一、方法學(xué)的影響
    ELISA測定模式包括以下幾種：雙抗體夾心法、間接法、雙抗原夾心法、IgM抗體捕捉法、競爭抑制法，其中競爭抑制法(HBeAb,HBcAb等采用)因受操作時差所引起的不公平競爭等因素的影響，結(jié)果重復(fù)性較差，質(zhì)量較難控制。
第二、試劑因素
    不同批次的ELISA試劑在制作過程中很難保證質(zhì)量完全一致，即使是通過批批檢的項目其檢測結(jié)果也存在差異，因此必須選擇和訂購長批號的試劑，并保證保存條件。嚴格執(zhí)行這一標準可以避免因試劑批號改變而重新建立質(zhì)控體系及重新評估試劑的復(fù)雜過程，并且能夠保證結(jié)果的穩(wěn)定性；對于效期短、使用率低的試劑，應(yīng)當小量分裝，每次使用則取分裝部分即可，避免反復(fù)凍融造成試劑的失效。
第三、樣本因素
    標本干擾因素包括內(nèi)源性干擾因素和外源性干擾因素，前者包括類風(fēng)濕因子、補體、異嗜性抗體、自身抗體、溶菌酶等，后者包括標本溶血、標本被細菌污染、標本貯存時間過長、標本凝固不全、冷凍標本的反復(fù)凍融等。
第四、操作因素
    ELISA操作步驟復(fù)雜，操作不當將引起較大的誤差。加樣、溫育、洗滌、顯色、比色。
第五、灰區(qū)的設(shè)置
    通常情況下，ELISA定性實驗以“陽性”和“陰性”來報告結(jié)果，兩者間有一條分界線被稱為“陽性判斷值”(cut-off value，CO值)，這是定性免疫測定結(jié)果報告的依據(jù)。
第六、標本復(fù)查
    ELISA手工檢測過程復(fù)雜，影響因素較多，即使室內(nèi)質(zhì)控在控，也可能因孔間差異而造成結(jié)果的差異，因此加大復(fù)查力度是保證結(jié)果準確性的可靠方法，比如對HBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等項目的可疑、弱陽性標本及少見模式的檢測結(jié)果進行復(fù)查。
第七、常表示結(jié)果的常用方法
      1.定性測定
      2.半定量測定 結(jié)果一般以滴度表示。
      3.定量測定 即用已知量的標準品作一系列稀釋后進行ELISA測定，繪制標準曲線，結(jié)果以絕對量或單位表示。在ELISA定量檢測中每一塊反應(yīng)板都必須繪制相應(yīng)的標準曲線。