ELISA試劑盒有著準(zhǔn)確性高 靈敏度高 特異性強(qiáng)的諸多優(yōu)點(diǎn),在實(shí)驗(yàn)室的應(yīng)用已經(jīng)相當(dāng)普及,絕大多數(shù)是用于檢測(cè)未知樣本中抗原的濃度.現(xiàn)在市面上的ELISA試劑盒既有國(guó)產(chǎn)也有進(jìn)口,數(shù)量繁多令人目不暇接,而且質(zhì)量也是參差不齊,那么我們?cè)鯓硬拍苓x出最適用的產(chǎn)品呢？首先要根據(jù)我們所要檢測(cè)的分子進(jìn)行檢測(cè),除此以外也還有一些需要加以考量的因素,下面就為大家提供幾點(diǎn)參考.
ELISA試劑盒雖然有多種類型,不過(guò)它們都有一個(gè)共同特點(diǎn),就是進(jìn)行抗原捕獲.一般捕獲形式包括將抗原吸附到微孔板或者用微孔板上的抗體進(jìn)行捕獲.In-cell ELISA和酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)ELISPOT是兩種特殊的類型,In-cell ELISA需要將微孔板中培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行固定和通透化,然后再用抗體原位檢測(cè).ELISPOT有點(diǎn)像蛋白印跡Western blot,先在帶膜的微孔板中培養(yǎng)細(xì)胞,然后在膜上檢測(cè)細(xì)胞分泌的抗原形成斑點(diǎn).此外,我們還需要根據(jù)自身需要選擇96孔板或是384孔板進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn).
如今檢測(cè)ELISA有許多途徑,我們可以根據(jù)自己的偏好進(jìn)行選擇.一般ELISA檢測(cè)的是酶促反應(yīng)的可溶性產(chǎn)物,抗體上結(jié)合有相應(yīng)的酶（例如通常使用的辣根過(guò)氧化物酶HRP）,而反應(yīng)體系中添加有相應(yīng)的底物（如3,3-二氨基聯(lián)苯胺DAB）.這種酶促反應(yīng)生成具有特征性的顏色,可以通過(guò)分光光度計(jì)進(jìn)行檢測(cè),堿性磷酸酶AP也是一種常用酶.酶可以結(jié)合在一抗上,也可以結(jié)合在二抗上,還可以使用鏈霉親和素標(biāo)記的酶與親和素標(biāo)記的一抗結(jié)合.此外ELISA的結(jié)果檢測(cè)還包括放射性檢測(cè) 熒光檢測(cè) 化學(xué)發(fā)光或顯色法檢測(cè)等.
單克隆抗體和多克隆抗體都能夠用于ELISA試劑盒,實(shí)際上有時(shí)候二者結(jié)合效果更好.例如,對(duì)于雙抗夾心法而言,用多抗進(jìn)行捕獲而單抗進(jìn)行檢測(cè)有時(shí)更有幫助.多抗能夠確保捕獲所有抗原,隨后單抗再特異性檢測(cè)擁有特定抗原表位的抗原.
如果抗體間發(fā)生沖突或交叉反應(yīng)就會(huì)影響整個(gè)實(shí)驗(yàn)的特異性.其中抗體來(lái)源所帶來(lái)的兼容性就是交叉反應(yīng)的一個(gè)因素.盡管現(xiàn)在購(gòu)買源自指定動(dòng)物的抗體越來(lái)越容易,我們?nèi)杂斜匾_認(rèn)一下是否會(huì)產(chǎn)生交叉反應(yīng)的問(wèn)題.在用雙抗夾心法進(jìn)行ELISA檢測(cè)時(shí),檢測(cè)用的二抗必須特異性針對(duì)檢測(cè)一抗,而不能與捕獲抗體起反應(yīng).如果檢測(cè)用二抗與捕獲抗體結(jié)合,實(shí)驗(yàn)特異性就會(huì)大打折扣.通常我們選用源自不同宿主的捕獲抗體和檢測(cè)一抗,來(lái)避免上述問(wèn)題.
