免疫學(xué)是研究生物體對(duì)抗原物質(zhì)免疫應(yīng)答性及其方法的生物-醫(yī)學(xué)科學(xué).免疫應(yīng)答是機(jī)體對(duì)抗原刺激的反應(yīng),也是對(duì)抗原物質(zhì)進(jìn)行識(shí)別和排除的一種生物學(xué)過程.在免疫學(xué)中,IHC Western ELISA,三大實(shí)驗(yàn)分別用于定位,定性和定量.
IHC(免疫組化Immunohistochemistry)
是融合了免疫學(xué)原理(抗原抗體特異性結(jié)合)和組織學(xué)技術(shù)(組織的取材 固定 包埋 切片 脫蠟 水化等),通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑 (熒光素 酶 金屬離子 同位素)顯色,來對(duì)組織(細(xì)胞)內(nèi)抗原進(jìn)行定位 定性及定量的研究(主要是定位).樣本是細(xì)胞或組織,要在顯微鏡下觀察結(jié)果,可能出現(xiàn)膜陽性 質(zhì)陽性和核陽性.
ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)Enzyme linked immunosorbent assay)
用到了免疫學(xué)原理和化學(xué)反應(yīng)顯色,待測(cè)的樣品多是血清 血漿 尿液 細(xì)胞或組織培養(yǎng)上清液,因而沒有用到組織包埋 切片等技術(shù),這是與免疫組化的主要區(qū)別,操作上 開始需要將抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面,從而使后來形成的抗原-抗體-酶-底物復(fù)合物粘附在載體上,這就是“吸附”的含義.
WB (蛋白質(zhì)印跡Western Blot)
先要進(jìn)行SDS-PAGE,然后將分離開的蛋白質(zhì)樣品用電轉(zhuǎn)儀轉(zhuǎn)移到固相載體上,而后利用抗原-抗體-標(biāo)記物顯色來檢測(cè)樣品,可以用于定性和半定量.
對(duì)于IHC來說,定位是免疫組化最大的優(yōu)勢(shì)
該方法可在組織和細(xì)胞中進(jìn)行抗原的準(zhǔn)確定位,因而可同時(shí)對(duì)不同抗原在同一組織或細(xì)胞中進(jìn)行定位觀察,這樣就可以進(jìn)行形態(tài)與功能相結(jié)合的研究,相比于其他蛋白檢測(cè)方法,免疫組化具有定位較直接準(zhǔn)確 定性靈敏度高,是定位檢測(cè)分析首選方法對(duì)病理學(xué)領(lǐng)域開展深入研究是十分有意義,尤其對(duì)于有些因子的轉(zhuǎn)位研究十分有用.
WB與IHC技術(shù)相比,定量可能更加準(zhǔn)確
當(dāng)然WB也可定性和定位(通過提取膜蛋白或核蛋白 胞漿蛋白分別檢測(cè)其中抗原含量,進(jìn)而間接反映它們的定位),但敏感性遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于IHC.
ELISA與免疫組化技術(shù)相比,定量最準(zhǔn)確,是分泌性蛋白檢測(cè)首選方法之一.
尤其對(duì)于微定量分析多個(gè)樣本非常有用,所用試劑和樣品量很少,結(jié)果精確.IHC針對(duì)性比較強(qiáng),而且一般是以組織或者細(xì)胞為樣本,而ELISA一般是使用血清或者組織磨碎液.免疫組化可以快速檢測(cè)樣本中抗體的陽性或者陰性,一般不用于定量檢測(cè).
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