ELISA測(cè)定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術(shù)要求,在科研的過(guò)程中,時(shí)�？梢�(jiàn)到一些錯(cuò)誤結(jié)果,如：標(biāo)本的影響.那么,就由上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司為大家解讀ELISA檢測(cè)實(shí)驗(yàn)不成功的主要因素有哪幾個(gè)？
第一 標(biāo)本的影響
溶血標(biāo)本及混有紅細(xì)胞的血清采用ELISA法檢測(cè)易產(chǎn)生假陽(yáng)性.可能是溶血血清中含有過(guò)氧化酶物質(zhì)（紅細(xì)胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素）,在洗滌過(guò)程中往往難以完全洗脫,它可使H2O2釋放出原生態(tài)氧（O）,從而催化底物四甲基聯(lián)苯胺生成可溶性的有色物質(zhì),即顯藍(lán)色,產(chǎn)生假陽(yáng)性.所以嚴(yán)重溶血標(biāo)本禁用.
第二 標(biāo)本受細(xì)菌污染
因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過(guò)氧化物酶,因此,被細(xì)菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本一樣,亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測(cè)定結(jié)果.
第三 標(biāo)本保存不當(dāng)
在冰箱中保存過(guò)久的標(biāo)本,在間接法ELISA測(cè)定中會(huì)導(dǎo)致本底過(guò)深 造成假陽(yáng)性；為克服上述干擾,ELISA試劑盒測(cè)定的血清標(biāo)本宜為新鮮采集；如不能立即測(cè)定,5d內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可存放于4℃,1周后測(cè)定的血清標(biāo)本應(yīng)低溫凍存；凍存后融解的標(biāo)本,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混合后再測(cè)定,但混勻時(shí)應(yīng)輕柔,不可強(qiáng)烈振蕩.
第四 標(biāo)本凝固不全
在工作中,有時(shí)為了爭(zhēng)取時(shí)間快速檢測(cè),常在血液還未開(kāi)始凝固時(shí)即強(qiáng)行離心分離血清,使血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測(cè)定過(guò)程中可以形成肉眼可見(jiàn)的纖維蛋白塊,易造成假陽(yáng)性結(jié)果；因此血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清.
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