案例:吉林大學張老師通過網(wǎng)絡(luò)了解到上海恒遠生物科技有限公司,張老師提出想做雞的相關(guān)指標(IL-2、IL-6、TNF-α、IFN-γ、皮質(zhì)醇、免疫球蛋白IgG)elisa試劑盒,老師介紹到樣本量較少16個樣本,而試劑盒的最小規(guī)格就是48T(48T可以檢測37個樣本,11孔做標準空白對照孔),我司銷售專員建議老師實驗可以做個復孔,這樣的實驗報告結(jié)果會更加精確。
張老師聽取了我司銷售專員的建議,在設(shè)計ELISA復孔檢查時,提出問題:是對同一個樣品作兩次稀釋,再分別加到板上的兩個孔,還是只稀釋一次,然后吸取兩次分別加到兩個孔?前者似乎把稀釋時的誤差也考慮到了,但做出來的結(jié)果兩個孔相關(guān)挺大的。
結(jié)論:我司技術(shù)答復張老師,我們將采用后者。如果在實驗室階段,可能需要多次稀釋,然后將不同稀釋次數(shù)的分別做復孔,以便檢查稀釋過程中帶來的誤差;如果同一次稀釋的復孔一致的存在檢測差異大,可能ELISA板的均一性存在一定問題(排除操作因素)。如果不同稀釋次數(shù)差異大,說明稀釋方法有問題。
在ELISA實驗中設(shè)復孔,目的是為了減少本次實驗的系統(tǒng)誤差對實驗數(shù)據(jù)帶來的影響,所以應該用第二種,有條件的話復孔的數(shù)量可以增加,系統(tǒng)誤差更小。
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