實驗室玄學千千萬，預測和結(jié)果不符占一半。

    WB實驗是各位同學們，時常光顧的一個實驗。但就是這樣一個初級又常用的實驗，卻會出現(xiàn)各種稀奇古怪的問題。比如在WB實驗鑒定蛋白時，我們得到的蛋白質(zhì)條帶大小常常會和預測值有所偏差。這是身患“強迫癥”的同學們不能忍的。如果是實驗出錯或者預測不準這種情況，小編是沒辦法跳出手機屏幕救你了。但這下面的 5 條準則，同學們倒是可以珍藏一下，在遇到蛋白質(zhì)條帶大小和預測值偏差的時候，拿出來分析一下。

    一、內(nèi)源性蛋白or重組蛋白

    查問題要從源頭查起，所以各位艾粉們要先看一看樣品是內(nèi)源性蛋白還是重組蛋白？

    如果是內(nèi)源性蛋白還不打緊，如果是重組蛋白，那么馬上就要看一看重組蛋白是否為全長序列了。假如樣品是重組蛋白，還不是全長序列，那么條帶大小一定會和預測大小不一致。

    二、多個 isoform 辨仔細

    如果確定了樣品是內(nèi)源蛋白，那就要看看我們的目標蛋白是不是有其他的 isoform，這個我們通常會去查看 NCBI 或者 SWISSPROT 來確認。

    三、剪切活化要注意

    如果在 SWISSPROT 或者權(quán)威的文獻里提到了，樣品的這個蛋白需要剪切活化，那么結(jié)果又要和預測值不同啦。

    四、成倍增長多聚體

    如果蛋白大小和預測值有明顯倍數(shù)關(guān)系，那就要考慮一下這個蛋白是不是二聚體或者多聚體啦。

    五、蛋白修飾要變大

    如果排除了以上 4 條原因，預測值和實驗結(jié)果不一致，那就是因為我們面對的蛋白質(zhì)，是個善變的對象，它不僅會剪切活化，還有在翻譯表達后修飾。比如：比如甲基化、乙�；�、磷酸化、糖基化、烷基化、生物素化、谷氨酸化、甘氨酸化、硫酸化、異戊二烯化、硫辛酸化、磷酸泛酰巰基乙胺基化……。在不同狀態(tài)下的蛋白質(zhì)還會有不同的修飾。加入了官能團肯定會讓蛋白質(zhì)比預測值偏大。在日常的實驗中，糖基化是比較常見的修飾，一般會導致跑出來的條帶比預測值大那么一些。

總結(jié)：

1.確定蛋白是內(nèi)源的還是外源的，如果是外源蛋白是不是全長序列；

2.SWISSPROT 數(shù)據(jù)庫查詢該蛋白是否有其他 isoform；

3.SWISSPROT 和文獻查詢蛋白質(zhì)是否有剪切活化，剪切活化造成蛋白變��；

4.確定蛋白質(zhì)是否是二聚體或多聚體。

5.NCBI 和 SWISSPROT 查詢蛋白質(zhì)表達后是否有修飾，如有修飾會導致蛋白質(zhì)增大；

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