常有伙伴問ELISA試劑盒定性定量有什么區(qū)別？今天恒遠(yuǎn)生物就給大家把這個難題給解答咯，定性分析與定量分析應(yīng)該是統(tǒng)一的，相互補充的；定性分析是定量分析的基本前提，沒有定性的定量是一種盲目的、毫無價值的定量；定量分析使之定性更加科學(xué)、準(zhǔn)確，它可以促使定性分析得出廣泛而深入的結(jié)論。

    定性試劑盒是判斷一種物質(zhì)在某種樣本中的有無，一般表示為陰性或者陽性，具體是通過OD值來判定的，不能計算出該物質(zhì)的具體濃度。一般定性試劑盒只會自帶一種陰性標(biāo)準(zhǔn)和一種陽性標(biāo)準(zhǔn)。

    定量試劑盒是用來測定一種物質(zhì)在某種樣本中的具體濃度值是多少，一般是有單位的，比如ng/ml，這種試劑盒主要是用來測定這種物質(zhì)的具體變化情況，例如是升高了還是降低了，升高了多少，降低了多少等等。一般用到定量的試劑盒的時候就已經(jīng)確定樣本中含有該物質(zhì)。

今天就拿白介素6（IL-6）酶聯(lián)免疫試劑盒在實驗中的操作步驟給大家嘮嘮，請搬起小板凳，來圍觀吧！

采用酶聯(lián)免疫法檢測恒遠(yuǎn)生物 IL-6試劑盒含量，檢測嚴(yán)格按照說明書操作。主要步驟：

(1)樣品解凍：將血清從冷凍冰箱取出后，先放置于2-8℃冰箱使之全融，融解過程將血清規(guī)則地?fù)u晃均勻。(實驗前室溫平行一小時，盡量保持樣本和試劑盒保持同一溫度)

(2)編號：將樣品在酶標(biāo)包被板上對應(yīng)的微孔按照順序依次編號，每板分別設(shè)立2個陰性對照孔、2個陽性對照孔、1個空白對照孔（注意不添加任何樣品及酶標(biāo)試劑到空白對照孔當(dāng)中，其他的操作步驟均相同） 

(3)加樣：分別先將50μl的陰性對照液體、陽性對照液體加到酶標(biāo)包被板上對應(yīng)的陰、陽性對照孔當(dāng)中。然后再將40μl的樣品稀釋液加到待測樣品孔當(dāng)中，最后將10μl的待測樣品加到待測樣品孔當(dāng)中。注意加樣時盡量不碰到孔壁，加樣加在酶標(biāo)包被板板孔底部，輕輕搖動充分混勻。

(4)溫育：先用封板膜將酶標(biāo)包被板封板，然后放置于37℃恒溫箱當(dāng)中，溫育30分鐘。 

(5)配液：用蒸餾水30倍稀釋30倍濃縮洗滌液后備用 

(6)洗滌：先小心地把封板膜揭去，然后將液體輕輕地棄去并甩干，將洗滌液加滿每個板孔，經(jīng)過30秒的靜置之后棄去，這樣重復(fù)5次，最后拍干。 

(7)加酶：除了空白孔之外，將50μl酶標(biāo)試劑加到每個板孔當(dāng)中。 

(8)溫育：再次用封板膜將酶標(biāo)包被板封板，然后放置于37℃恒溫箱當(dāng)中，溫育30分鐘。  

(9)洗滌：先小心地把封板膜揭去，然后將液體輕輕地棄去并甩干，將洗滌液加滿每個板孔，經(jīng)過30秒的靜置之后棄去，這樣重復(fù)5次，最后拍干。 

(10)顯色：首先將50μl顯色劑A加入到每個板孔當(dāng)中，然后再將50μl顯色劑B加入到每個板孔當(dāng)中，輕輕震蕩混勻，最后放置于37℃恒溫箱中當(dāng)中避光顯色15分鐘。

(11)終止：將50μl終止液加到每個板孔當(dāng)中來終止反應(yīng)，此時可看到藍(lán)色立即轉(zhuǎn)為黃色。 

(12)測定：在加終止液15分鐘以內(nèi)必須進(jìn)行吸光度（OD值）的測定，拿空白孔調(diào)零，以450nm 的波長按照順序依次測量各孔的值。

計算和結(jié)果的判定：按照說明書計算臨界值（CUT OFF）

陽性結(jié)果判定：樣品OD值≥臨界值（CUT OFF）者為沙眼衣原體相關(guān)抗體陽性

陽性結(jié)果判定：樣品OD值<臨界值（CUT OFF）者為沙眼衣原體相關(guān)抗體陰性

采用酶聯(lián)免疫法定量檢測血清、宮頸分泌物中IL-6。檢測嚴(yán)格按照說明書操作。主要步驟：

(1)樣品解凍：將血清從冷凍冰箱取出后，先放置于2-8℃冰箱使之全融，融解過程將樣品規(guī)則地?fù)u晃均勻。

(2)標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：按照試劑說明書中的方法。（補充一下宮頸分泌物中與血清的不同點？？）說明：血清其實很簡單，無非去上清液待檢即可，但分泌物受制約于樣本的收集，比如棉拭子浸潤的程度，包括后期樣本提取過程加入的PBS的量的多少，都會對最終結(jié)果產(chǎn)生影響，但對于抗體本身的陰性和陽性判定來講，問題不大，主要是檢測含量的時候可能會有一些波動

(3)加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50μl，然后再將40μl的樣品稀釋液加到待測樣品孔當(dāng)中，最后將10μl的待測樣品加到待測樣品孔當(dāng)中。注意加樣時盡量不碰到孔壁，加樣加在酶標(biāo)包被板板孔底部，輕輕搖動充分混勻。

(4)溫育：先用封板膜將酶標(biāo)包被板封板，然后放置于37℃恒溫箱當(dāng)中，溫育30分鐘。 

(5)配液：用蒸餾水30倍稀釋30倍濃縮洗滌液后備用 

(6)洗滌：先小心地把封板膜揭去，然后將液體輕輕地棄去并甩干，將洗滌液加滿每個板孔，經(jīng)過30秒的靜置之后棄去，這樣重復(fù)5次，最后拍干。 

(7)加酶：除了空白孔之外，將50μl酶標(biāo)試劑加到每個板孔當(dāng)中。 

(8)溫育：再次用封板膜將酶標(biāo)包被板封板，然后放置于37℃恒溫箱當(dāng)中，溫育30分鐘。  

(9)洗滌：先小心地把封板膜揭去，然后將液體輕輕地棄去并甩干，將洗滌液加滿每個板孔，經(jīng)過30秒的靜置之后棄去，這樣重復(fù)5次，最后拍干。 

(10)顯色：首先將50μl顯色劑A加入到每個板孔當(dāng)中，然后再將50μl顯色劑B加入到每個板孔當(dāng)中，輕輕震蕩混勻，最后放置于37℃恒溫箱中當(dāng)中避光顯色15分鐘。

(11)終止：將50μl終止液加到每個板孔當(dāng)中來終止反應(yīng)，此時可看到藍(lán)色立即轉(zhuǎn)為黃色。 

(12)測定：在加終止液15分鐘以內(nèi)必須進(jìn)行吸光度（OD值）的測定，拿空白孔調(diào)零，以450nm 的波長按照順序依次測量各孔的值。

計算：用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

恒遠(yuǎn)生物 白介素指標(biāo)試劑盒文獻(xiàn)支持（部分精選）

【文獻(xiàn)標(biāo)題】Effects of Taishan Pinus massoniana pollen polysaccharide on the subunit vaccine of Proteus mirabilis in birds

【作者單位】山東農(nóng)業(yè)大學(xué)（Shandong Agricultural University）

【文獻(xiàn)中引用產(chǎn)品】

雞白細(xì)胞介素2（IL-2）ELISA試劑盒

【DOI】http://dx.doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2013.02.006

【影響因子(IF)】4.97

【出版期刊】《International Journal of Biological Macromolecules》

【文獻(xiàn)標(biāo)題】Therapeutic effect of human amniotic epithelial cells in murine models of Hashimoto’s thyroiditis ａnd Systemic lupus erythematosus

【作者單位】浙江大學(xué)（Zhejiang University）

【文獻(xiàn)中引用產(chǎn)品】

小鼠白介素17A（IL-17A）ELISA試劑盒

小鼠白介素4（IL-4）ELISA試劑盒

小鼠白介素10（IL-10）ELISA試劑盒

【DOI】https://doi.org/10.1016/j.jcyt.2018.04.001

【影響因子(IF)】3.84

【出版期刊】《International Society》

【文獻(xiàn)標(biāo)題】Modeling analysis of the relationship between atherosclerosis ａnd related inflammatory factors

【作者單位】鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院（The Second Affiliated Hospital of Zhengzhou University）

【文獻(xiàn)中引用產(chǎn)品】

人白細(xì)胞介素6(IL-6)ELISA試劑盒

【DOI】https://doi.org/10.1016/j.sjbs.2017.11.016

【影響因子(IF)】3.14

【出版期刊】《Saudi Journal of Biological Sciences》

【文獻(xiàn)標(biāo)題】Both MicroRNA-155 ａnd Virus-Encoded MiR-155 Ortholog Regulate TLR3 Expression

【作者單位】揚州大學(xué)（Yangzhou University）

【文獻(xiàn)中引用產(chǎn)品】

雞白細(xì)胞介素6（IL-6）ELISA試劑盒

【DOI】DOI:10.1371/journal.pone.0126012

【影響因子(IF)】3.02

【出版期刊】《PLOS ONE》

【文獻(xiàn)標(biāo)題】Effect of peritoneal lavage with ulinastatin on the expression of NF-κB ａnd TNF-α in multiple organs of rats with severe acute pancreatitis

【作者單位】解放軍總醫(yī)院（PLA General Hospital）

【文獻(xiàn)中引用產(chǎn)品】

大鼠白介素1（IL-1）ELISA試劑盒

大鼠白介素6（IL-6）ELISA試劑盒

【DOI】DOI: 10.3892/etm.2015.2802

【影響因子(IF)】1.50

【出版期刊】《Experimental ａnd Therapeutic Medicine》

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