血清和血漿是酶聯(lián)免疫試劑盒實(shí)驗(yàn)中常用的樣本類型,那么制備方法是什么呢,到底該如何制備,不要著急,恒遠(yuǎn)生物給你嘮嘮。
一、血清(serum)的一般制備方法可參考以下:
1.采集血液樣本,置于不含抗凝劑的收集管內(nèi)(試管或離心管)。
2.室溫下靜置自然凝集30~60min,待血液凝固。
3.沿收集管壁將血凝塊輕輕劃開。
4.4℃放置過夜,平衡后,低溫低速離心10min。
(低溫:4℃;低速:人血~2000rpm、小鼠~1000rpm、大鼠~2500rpm)
5.上清即為血清,大概1ml血液能收集300-400ul血清。
6.立即操作、冷藏或冷凍血清樣品。
二、血漿(plasma)的一般制備方法可參考以下:
1.采集血液樣本,置于含有適當(dāng)抗凝劑的收集管內(nèi)(試管或離心管)。
2.輕輕顛倒搖動(dòng)收集管,以混勻血液。
3.低溫低速離心10min(血樣采集后1h之內(nèi)進(jìn)行)。
4.上清即為血漿。
5.立即操作,冷藏或冷凍血漿樣品。
常見血清問題分析:
問題一:如何貯存和凍結(jié)血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損?
答:將血清從冷凍箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。但有必要注意的是,融解過程中有必要規(guī)矩地?fù)u晃均勻。長(zhǎng)時(shí)刻貯存在2-8℃時(shí),血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而構(gòu)成沉積或可見的混濁。因而,推薦在-20℃以下貯存血清,并防止反復(fù)凍融。主張血清應(yīng)保存在-2O℃。若存放于4℃時(shí),請(qǐng)勿超過一個(gè)月。若一次無(wú)法用完一瓶,主張無(wú)菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi),再放回冷凍。
問題二:血清中包含絮狀沉積,它們是什么,怎樣處理?
答:沉積包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性,不會(huì)影響產(chǎn)品性質(zhì)。要除掉沉積,離心血清(400g,1-2分鐘)或許簡(jiǎn)單的讓其沉積在瓶子底部,將血清當(dāng)心的 轉(zhuǎn)移到另一個(gè)無(wú)菌瓶里(一般不主張選用過濾的辦法除掉沉積,由于沉積會(huì)堵塞濾膜而無(wú)法過濾)。大多情況輕輕搖動(dòng)沉積并加熱至37℃就會(huì)再溶解。所以,運(yùn)用 產(chǎn)品時(shí)要搖動(dòng)并加熱血清至37℃,沉積會(huì)天然消失。
問題三:如何防止血清中發(fā)作沉積?
答:按如下操作可防止沉積的發(fā)作:
(1)凍結(jié)血清時(shí),請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,削減沉積的發(fā)作。
(2)血清分裝凍存時(shí),須規(guī)矩?fù)u晃均勻(當(dāng)心勿形成氣泡),使溫度與成分均一。
(3)勿直接由-20℃直接至37℃凍結(jié),因溫度改變太大,簡(jiǎn)單形成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)作沉積。
(4)勿將血清置于37℃太久,否則血清會(huì)變得污濁,一起血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會(huì)因而受到破壞,從而影響血清的品質(zhì)。
(5)血清的熱滅活非常簡(jiǎn)單形成沉積物的增多,若非必要,能夠無(wú)須做此步驟。
(6)若有必要做血清的熱滅活,請(qǐng)遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過高,時(shí)刻過久或搖晃不均勻,都會(huì)形成沉積物的增多。
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