ELISA實驗終于做完了,結果被計算難倒了,作為科研人絕不認輸,今天恒遠小編就給大家分享一下,如何用 Origin 計算 ELISA 實驗結果。作為 ELISA 的最后一步,檢測結果的計算對整個實驗十分重要,一不小心就前功盡棄了......
以夾心法為例:
1. ELISA 的樣本通常要設置 1~2 個復孔進行檢測,分別求出標準品、實驗組樣本的吸光度的平均值。單個樣本的檢測值不應超出平均值的 20%。
2. 樣本的 OD(吸光度)平均值要減去標準品濃度為 0 時的 OD 平均值。
3. 建立標準曲線。
在對數(shù)坐標圖上擬合四參數(shù)的邏輯函數(shù)曲線(X 軸上為標準品濃度,Y 軸為對應的OD值)。推薦使用 origin 軟件。詳細步驟如下:
第一步:輸入 OD 值和標準品濃度
第二步:選擇擬合曲線類型
選中輸入的數(shù)值框,按如下操作依次點擊選項。
第三步:勾選「find specific X/Y」
完成上述操作后,點擊 Fit 按鍵,擬合曲線和相關信息將自動生成(如第四步所示)
第四步:查看標準曲線信息(如參數(shù)值,R-Square 等)
第五步:設置坐標軸類型為對數(shù)
第六步:根據(jù)標準曲線計算樣本濃度
選擇第四個工作表(Fit NLF Find X from Y1),在左列輸入樣本的 OD 值,對應的濃度將在右列自動生成。
如果樣本的 OD 值超出標準曲線的上限,請在實驗前適當稀釋樣本以獲得精確結果。在分析數(shù)據(jù)時,樣本實際濃度應為標準曲線上獲得的濃度乘以稀釋倍數(shù)。