系利用鱟試劑與細菌內(nèi)毒素產(chǎn)生凝聚反應的原理，以判斷供試品中細菌內(nèi)毒素的限量是否符合規(guī)定。細菌內(nèi)毒素國家標準品  系自大腸桿菌提取精制而成，用于標定、復核、仲裁鱟試劑靈敏度和標定細菌內(nèi)毒素工作標準品的效價。

 

細菌內(nèi)毒素工作標準品系以細菌內(nèi)毒素國家標準品為基準標定其效價，用于試驗中鱟試劑靈敏度復核、干擾試驗及設置的各種陽性對照。細菌內(nèi)毒素工作標準品中每1 ng細菌內(nèi)毒素的效價應不小于2 EU，不大于50 EU。細菌內(nèi)毒素檢查用水系指靈敏度為0.03 EU/ml或更高靈敏度的鱟試劑在37±1℃條件下24小時不產(chǎn)生凝集反應的滅菌注射用水。

 

鱟試劑靈敏度定義為在細菌內(nèi)毒素檢查法規(guī)定的條件下，能測出內(nèi)毒素標準溶液或供試品的溶液中的最低內(nèi)毒素濃度，用EU/ml表示。每批新的鱟試劑在用于試驗前都要進行靈敏度復核試驗，當鱟試劑λc（靈敏度測定值）在0.5~2.0λ(靈敏度標示值)時，方可用于細菌內(nèi)毒素檢查。

 

供試品對細菌內(nèi)毒素檢查法是否有干擾，可進行供試品干擾試驗。若有干擾，可使用更靈敏的鱟試劑以及對供試品進行更大倍數(shù)的稀釋或采用其他適合排除干擾作用的方法。

 

材料與儀器：細菌內(nèi)毒素、內(nèi)毒素 、鱟試劑溶液、試管、安瓿管、恒溫器。

 

實驗步驟：

 

一、實驗準備  

試驗所用器皿需經(jīng)處理，除去可能存在的外源性內(nèi)毒素，常用的方法是250℃干烤至少1小時，也可用其他適宜的方法，并應確證不干擾細菌內(nèi)毒素的檢查。試驗操作過程應防止微生物的污染。

 

二、檢查法  

取裝有0.1 ml鱟試劑溶液的10 mm×75 mm試管或復溶后的0.1 ml/支規(guī)格的鱟試劑原安瓿5支，其中2支加入0.1 ml按最大稀釋倍數(shù)稀釋的供試品溶液作為供試品管，1支加入0.1 ml用細菌內(nèi)毒素檢查用水將細菌內(nèi)毒素工作標準品制成的2.0λ濃度的內(nèi)毒素溶液作為陽性對照管，1支加入0.1 ml細菌內(nèi)毒素檢查用水作為陰性對照管，1支加入0.1 ml供試品陽性對照溶液[用被測供試品溶液將同一支(瓶)細菌內(nèi)毒素工作標準品制成2.0λ濃度的內(nèi)毒素溶液]作為供試品陽性對照管。將試管中溶液輕輕混勻后，封閉管口，垂直放入37±1℃適宜恒溫器中，保溫60±2分鐘。保溫和拿取試管過程應避免受到振動造成假陰性結果。

 

三、判斷結果

將試管從恒溫器中輕輕取出，緩緩倒轉180°時，管內(nèi)凝膠不變形，不從管壁滑脫者為陽性，記錄為（+）；凝膠不能保持完整并從管壁滑脫者為陰性，記錄為（-）。供試品管2支均為（-），應認為符合規(guī)定；如2支均為（+），應認為不符合規(guī)定；如2支中1支為（+），1支為（-），按上述方法另取4支供試品管復試，4支中1支為（+），即認為不符合規(guī)定。陽性對照管為（-）或供試品陽性對照管為（-）或陰性對照管為（+），試驗無效。