想要做好ELISA實驗不是一件容易的事，一個不小心，實驗結(jié)果就會出現(xiàn)偏差。近期很多顧客向我們咨詢，ELISA 實驗中，經(jīng)常會遇到樣本值偏低的問題，樣本類型包括血清、 血漿、組織勻漿、細胞裂解液等。下面是小編為大家總結(jié)的一些原因，一起來學(xué)習(xí)下吧！
1.樣本本身含量可以被檢測，有哪些原因?qū)е聹y值低呢？
1）試劑盒的保存
試劑盒要按照規(guī)定的方法保存，大家在購買試劑盒時請務(wù)必留心試劑盒不同組分的保存方法。
2）樣本上樣前的準備
這個過程包括樣本的制備、保存以及是否有經(jīng)歷過反復(fù)凍融。樣本的制備要根據(jù)樣本類型采用不同的方法，血清、血漿與細胞裂解液的制備方法均不同。 保存，包括保存溫度以及保存時間。一般推薦樣本制備后進行分裝后儲存在-20 度或-80 度，儲存時間不宜過久，因為長時間的儲存有可能導(dǎo)致目標蛋白的降解，致使檢測結(jié)果不理想。最后注意不要反復(fù)凍融，蛋白樣本反復(fù)凍融會導(dǎo)致降解發(fā)生。
3）稀釋方案
樣本的稀釋對于實驗的成功至關(guān)重要，稀釋過度以及稀釋不足均有可能導(dǎo)致樣本的測值低。
稀釋過度：一般情況下客戶都會根據(jù)文獻測值，以及檢測范圍估計一個稀釋倍數(shù)，恒遠生物的試劑盒在出廠之前也會做大量檢測，對于常規(guī)樣本如血清血漿，我們也會根據(jù)實驗室樣本測值情況推薦一個稀釋倍數(shù)。但實驗者如果直接按照估計或推測的稀釋倍數(shù)進行稀釋檢測后，發(fā)現(xiàn)樣本OD非常低。這是由于文獻作者用的樣本，樣本會存在一定的差異，這些測值有一定的參考意義，但如果照搬，可能會導(dǎo)致實驗失敗。
稀釋倍數(shù)不夠：鉤狀效應(yīng)，Elisa 實驗中發(fā)生鉤狀效應(yīng)主要是當(dāng)抗原與抗體比例不合適而導(dǎo)致假陰性的現(xiàn)象，抗原過量稱為后帶效應(yīng)。當(dāng)樣本中目標物含量很高，而沒有進行正確的稀釋，就有可能會導(dǎo)致假陰性反應(yīng)。解決方案依舊同稀釋過度的解決方案一樣，在正式實驗之前做預(yù)實驗。
2.分析物在樣品中本身濃度偏低
很多時候，實驗操作沒有問題，標準曲線良好，但檢測多次樣本依然不在檢測范圍。像細胞因子，如 IL-6 需在炎癥刺激情況才會大量產(chǎn)生，一般非炎癥樣本測值會非常低。針對這種測值比較低的情況，一般建議根據(jù)文獻選取適合的樣本類型，同時可以選用高靈敏度的試劑盒，恒遠生物針對某些容易出現(xiàn)測值低的指標都有研發(fā)出高靈敏度的試劑盒，如IL-6 等。
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