“OD值”這個概念想必做實驗的各位小伙伴們都不陌生,從判斷提取核酸的質(zhì)量及濃度,到BCA蛋白定量進行蛋白定量,又或者是ELISA實驗檢測目的蛋白含量,這些常用的基礎(chǔ)實驗都需要檢測樣品的“OD值”,但是,“OD值”到底是什么,我們在測量“OD值”的時候又有哪些需要注意的問題,今天就讓小編給小伙伴們好好說道說道。什么是“OD”值?
OD全稱optical density,也就是光密度,也可以稱為吸光度。吸光度指的是利用物質(zhì)特有的吸收光譜,來鑒別物質(zhì)或者測定物質(zhì)的含量,也就是將一束特定波長的光通過被檢測物,被檢測物可以將光吸收掉一部分,通過吸光度計算被檢測物的濃度。一般被檢測物濃度越高,吸光度的值就會越高。實驗中也是利用“OD值”和被檢測物的濃度之間的關(guān)系來根據(jù)吸光度。
測量“OD值”注意事項:
最需要注意的就是測量時的光波長。吸光度利用的是物質(zhì)特有的吸收光譜,實際操作中我們需要注意的最關(guān)鍵的也是這一點,不同物質(zhì)的吸收光譜不同,最大吸收峰的波長也不同,為了達到最好的測量效果,一般來講,我們需要在待測物質(zhì)的最大吸收波長處來檢測其“OD值”。例如,核酸在260nm波長處光吸收最大,而蛋白和酚類物質(zhì)則在280nm波長處光吸收最大;BCA法檢測蛋白含量時,顯色反應(yīng)后,溶液由淺綠色變?yōu)樽仙,此時在560nm處有最大光吸收值;TMB法顯色的ELISA實驗,在加入終止液后溶液由藍色變?yōu)辄S色,在450nm處有最大光吸收。
對于測量得到的待測樣本“OD值”還需要進行換算才可以得到最終的濃度,有很多小伙伴往往在這一步出現(xiàn)錯誤,功虧一簣。需要注意的地方也比較簡單,就是根據(jù)對應(yīng)試劑盒的說明書,采用推薦的曲線擬合方式進行擬合,擬合后需要看一下擬合曲線的R2值,約接近1證明曲線擬合度越高,結(jié)果越可信。如果R2值較低,則需要檢查是否出現(xiàn)標準品稀釋問題或?qū)嶒灢僮鞒霈F(xiàn)失誤。
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