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ELISA檢測結(jié)果不理想的原因?
發(fā)布時間:2024/5/27 10:19:25 已瀏覽次數(shù): 137 次

    ELISA作為經(jīng)典的免疫檢測方法,看起來很平常,然而真正做好它并不容易。恒遠(yuǎn)專注科研試劑盒的研發(fā)及銷售多年,涉及分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)等生命科學(xué)的各個領(lǐng)域,滿足您實驗所需,以實現(xiàn)與客戶的雙贏,完善的庫存及供應(yīng)體系以及高效穩(wěn)定的專業(yè)技術(shù),保證產(chǎn)品均能現(xiàn)貨供應(yīng)。有哪些方法可以借鑒呢?恒遠(yuǎn)技術(shù)人員總結(jié)了以下幾點:


    一、確定您的樣本類型和試劑盒可以兼容

    常見樣本類型有血清,血漿,細(xì)胞培養(yǎng)上清,如果是廠家實驗驗證過的,可根據(jù)產(chǎn)品說明購買使用。

    注意:血漿制備用到的抗凝劑有 EDTA、檸檬酸鹽、肝素等多種,相應(yīng)的血漿性質(zhì)存在差異,需單獨確認(rèn)兼容性

    二、試劑盒檢測范圍需要匹配樣本中標(biāo)志物濃度

    elisa試劑盒的定量檢測范圍需參考標(biāo)準(zhǔn)曲線,在標(biāo)準(zhǔn)曲線最低和最高濃度區(qū)間內(nèi)屬于線性范圍,其中的值是可信和可定量的。濃度高于線性范圍的樣品要稀釋到線性范圍內(nèi)來測量,而濃度低于線性范圍的樣品,其測量值不能用于計算濃度,只能用做參考。有一種常見的相關(guān)情況是:健康人樣本中很多標(biāo)志物的濃度偏低,測量值低于標(biāo)準(zhǔn)曲線最低值。

    三、樣本收集有講究

    以血清為例,樣本收集可參考試劑盒說明書,但需注意以下要點。樣本盡量用無菌管收集,避免細(xì)菌的酶類和代謝產(chǎn)品對結(jié)果的影響。采集過程要避免溶血,因為紅細(xì)胞溶解釋放的活性物質(zhì)可能會影響檢測。保存過程中如有沉淀,應(yīng)離心后取上清液。樣本若不立即測定,建議按照每次使用量分裝保存在 -20℃,每次檢測使用一管,即避免交叉污染和反復(fù)凍融,有能保證檢測結(jié)果的平行可比性。

    四、實驗前要準(zhǔn)備好相應(yīng)試劑

    提前將所有試劑平衡到室溫環(huán)境,這個過程大致需半小時左右。洗液是濃縮液,如有結(jié)晶析出,需完全溶解后再進(jìn)行稀釋。A、B 兩管顯色底物在使用前15分鐘按 1:1 配成混合液。為保證蛋白標(biāo)準(zhǔn)品溶液配制質(zhì)量,蛋白標(biāo)準(zhǔn)品為凍干粉,重溶前需將管子離心,加入說明書指定的緩沖液,慢速在搖床上搖勻或顛倒混勻,至少 15 分鐘,不建議用槍頭吹打。溶解后如需保存,按每次使用量分裝后根據(jù)說明書要求的溫度保存。梯度稀釋蛋白標(biāo)準(zhǔn)品時,建議用聚丙烯管(對蛋白吸附力很低),每步都要充分混勻且更換新槍頭,確保梯度準(zhǔn)確性。

    五、儀器設(shè)備的準(zhǔn)備也必不可少

    相關(guān)設(shè)備包括移液器、洗板機(jī)/搖床和酶標(biāo)儀。移液器的準(zhǔn)確性對于ELISA實驗結(jié)果的可靠性十分關(guān)鍵,需要確保定期校準(zhǔn)維護(hù)。搖床的使用是為了讓反應(yīng)體系快速達(dá)到平衡,獲得穩(wěn)定、可重復(fù)的結(jié)果。不用搖床對實驗通常的影響是,OD 值低,CV 大。酶標(biāo)儀等設(shè)備使用前提前15分鐘開機(jī)預(yù)熱。

    恒遠(yuǎn)生物專業(yè)提供生命科學(xué)領(lǐng)域技術(shù)服務(wù),提供全方位實驗技術(shù)服務(wù),為廣大科研工作者大大節(jié)省了重復(fù)勞動的時間和精力,我們有過硬的技術(shù)咨詢和完善的售后服務(wù),為您解決后顧之憂。如您有實驗產(chǎn)品之需,趕緊前來訂購吧!
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