近期有客戶向我們咨詢胎牛血清細(xì)胞培養(yǎng)中黑點如何防止生成?對此我司技術(shù)專員給出了詳細(xì)了解釋,為防止客戶由于操作方面而使黑點生成的辦法。因此定要做好以下幾點。方可使細(xì)胞培養(yǎng)順利。
1.盡可能地減少血清凍融次數(shù)。
2.培養(yǎng)基無需37℃水浴。
3.培養(yǎng)基保持zuiPH 值7.0-7.2。
4.嚴(yán)格控制配制培養(yǎng)基的水質(zhì),容器定期刷洗。
5.掌握細(xì)胞傳代的zui時機,細(xì)胞切勿生長過老。
一、化凍
將血清從-20 度冰箱中取出,室溫(或浸于自來水中)化凍(約需要30分鐘至2小時,也可放于4度冰箱化凍過夜;化凍后若不馬上滅活,可以放入4度冰箱中暫時保存)
二、滅活
1.放入室溫的水浴鍋內(nèi)開始加熱(同時放入一個空的血清瓶,內(nèi)裝100ml自來水,插入一根溫度計,溫度監(jiān)控以此為準(zhǔn))
2.當(dāng)溫度計顯示56度時,停止加熱,改為間斷加熱,維持56度(±0.5度)30分鐘(±3分鐘;若不小心使溫度上升超過56度,則:若仍未超過60度,且時間很短,比如不超過5分鐘,則仍可使用;若超過60度,或者時間較長,則棄去不用,或者嘗試用于一些普通細(xì)胞的培養(yǎng))
3.取出,自然冷卻至室溫(約需1-3小時),可分裝或-20度繼續(xù)凍存。
三、分裝
1.轉(zhuǎn)入無菌間,在超凈臺內(nèi)將血清分裝入10ml離心管中(注意預(yù)先要將血清輕輕搖動數(shù)周、混勻;用吸液管或吹大管吹出血清時要注意:不要吹出氣泡(血清很粘稠,很容易產(chǎn)生氣泡;如果產(chǎn)生氣泡, 則在酒精燈火焰上過一下)。
2.放入-20 度冰箱凍存。
3.全部操作約需要4-6小時。
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