Xeno-Free人類間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基

產(chǎn)品貨號(hào)：Cat.No.:AC-1001003

產(chǎn)品基本信息

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

Xeno-Free人類間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基是埃澤思生物（Applied Cell^TM）自主研發(fā)的一款無(wú)外源動(dòng)物成分的人類間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基。可應(yīng)用于人類骨髓、脂肪、臍帶等組織來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞的原代分離、擴(kuò)增與傳代培養(yǎng)，并保持其多向分化潛能。GMP級(jí)別生產(chǎn)車間，嚴(yán)格執(zhí)行cGMP操作標(biāo)準(zhǔn)，各項(xiàng)指標(biāo)優(yōu)于行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。

Xeno-Free人類間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基主要成分：氨基酸，維生素、無(wú)機(jī)鹽、白蛋白，轉(zhuǎn)鐵蛋白、胰島素、微量元素，細(xì)胞因子等。 

產(chǎn)品特性

l 無(wú)外源動(dòng)物蛋白成分，大大降低各類病毒、霉菌和支原體等的污染風(fēng)險(xiǎn)。

l 全程無(wú)血清生產(chǎn)，極大降低批次間差異，避免實(shí)驗(yàn)條件的重復(fù)摸索。

l 培養(yǎng)載體無(wú)需包被，直接培養(yǎng)。

l 擴(kuò)增效率高，24h左右增殖翻倍，節(jié)省培養(yǎng)時(shí)間。

產(chǎn)品內(nèi)容

相關(guān)產(chǎn)品

Serum-Free細(xì)胞凍存液（Applied Cell^TM: Cat. no.AC-1001005/1001006）

人類臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（Applied Cell^TM: Cat. no.AC-2001003）

人類脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞（Applied Cell^TM: Cat. no.AC-2001004）

實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

人類間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基配制

1） 37℃快速解凍人類間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基添加劑，快速溶解時(shí)不易破壞添加劑中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，時(shí)間大致為10min。待添加劑融化后緩慢搖勻，分裝或直接按比例添加到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，分裝后添加劑立即儲(chǔ)存于-20℃至-80℃，避免反復(fù)凍融 。

2）將添加劑以10%比例加入到人類間充質(zhì)干細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，混勻，即為人類間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基（AC-1001003）。人類間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基（AC-1001003）可在2-8℃ 穩(wěn)定儲(chǔ)存2-3周，不建議使用已配制超過(guò)3周的培養(yǎng)基。

3）人類間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基（AC-1001003）可直接應(yīng)用于人類骨髓、脂肪、臍帶等組織來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞的原代分離、擴(kuò)增與傳代培養(yǎng)，具體操作方法及其他相關(guān)技術(shù)資料請(qǐng)參考埃澤思生物官網(wǎng)。

操作方法(以下步驟皆應(yīng)在無(wú)菌條件下操作)

hMSC細(xì)胞復(fù)蘇(10cm dish)

1.  從液氮中取出凍存的hMSC細(xì)胞，迅速將凍存管放入37℃水浴快速融解。

2.在生物安全柜或超凈臺(tái)中，將解凍后的細(xì)胞懸液緩慢加入5 mL預(yù)溫的人類間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基（AC-1001003）。

3.300g 離心3 min，吸掉上清，加入10ml人類間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基（AC-1001003）重懸細(xì)胞。

4.將細(xì)胞均勻鋪到培養(yǎng)皿中，水平十字振動(dòng)培養(yǎng)皿使細(xì)胞均勻分布，5% CO₂的37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)后觀察細(xì)胞狀態(tài)。

5.第2天吸掉原來(lái)培養(yǎng)基，加入新鮮的人類間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基（AC-1001003）繼續(xù)培養(yǎng)，每2天更換培養(yǎng)液。

hMSC細(xì)胞傳代培養(yǎng)

1.在顯微鏡下觀察細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到90%，即可傳代。

2.在超凈臺(tái)/安全柜中，吸走培養(yǎng)瓶中舊的人類間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基（AC-1001003），加入PBS溶液洗一次，加入人類間充質(zhì)干細(xì)胞消化液（AC-1001024/1001025）使之完全覆蓋皿/瓶底。

3.室溫孵育5-6分鐘或37℃孵育3-5分鐘，顯微鏡下觀察到大部分克隆邊緣開(kāi)始脫離皿/瓶底，克隆內(nèi)部細(xì)胞間出現(xiàn)間隙，停止消化。

4.加入與消化液2倍體積的人類間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基（AC-1001003）中和消化，用移液器輕輕吹打瓶壁上未完全脫離的細(xì)胞，并輕輕吹打混勻，使細(xì)胞完全分散。

5.將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到15 mL離心管中，1000 rpm離心3 min。

6.棄上清，加入人類間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基（AC-1001003），重懸細(xì)胞，1：3-1：4傳代，均勻鋪在培養(yǎng)皿/瓶中，置于37℃，5%CO₂ 條件下培養(yǎng)。

注意：細(xì)胞傳代所需的時(shí)間：2-4天。5代及之前的細(xì)胞，生長(zhǎng)速度較快。5代以后的細(xì)胞，生長(zhǎng)速度稍緩。

hMSC細(xì)胞凍存

1.  細(xì)胞達(dá)到80-90%匯合度， 吸走舊的人類間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基（AC-1001003），并且加入PBS溶液清洗。

2.加入人類間充質(zhì)干細(xì)胞消化液（AC-1001024/1001025）使之完全覆蓋皿/瓶底，室溫孵育5-8分鐘或37℃孵育3-5分鐘，顯微鏡下觀察到大部分克隆邊緣開(kāi)始脫離皿/瓶底，克隆內(nèi)部細(xì)胞間出現(xiàn)間隙，停止消化。

3.加入與消化液2倍體積的人類間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基（AC-1001003）中和消化，用移液器輕輕吹打瓶壁上未完全脫離的細(xì)胞，并輕輕吹打混勻，使細(xì)胞完全分散，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到15 mL離心管中，1000 rpm離心3 min，吸掉上清。

4.緩慢加入適量Serum-free細(xì)胞凍存液（AC-1001005/1001006），調(diào)整細(xì)胞密度在1×10⁶ cells/mL左右，每支凍存管分裝1.5-2ml。

5.輕輕地重懸細(xì)胞，將重懸均勻的細(xì)胞按等份加入到無(wú)菌凍存管（需提前做好標(biāo)記）中，旋緊凍存管蓋 。

6.直接放入-80℃，一天或兩天后放入液氮中長(zhǎng)期保存。

細(xì)胞形態(tài)圖

質(zhì)量控制