【產(chǎn)品文獻(xiàn)支持】

影響因子(IF)=3.61；The Expression and Function of NUMB in Endometrial Cancer and the Interaction with HDM2 and P53；復(fù)旦大學(xué)婦產(chǎn)科醫(yī)院；《Journal of Cancer》

細(xì)胞名稱：ishikawa細(xì)胞株

客戶收到Ishikawa細(xì)胞株后，請按照以下方法進(jìn)行操作。

1. 收到細(xì)胞，請查看瓶子是否有破裂，培養(yǎng)基是否漏出，是否渾濁，如有請盡快和我們聯(lián)系。

2. 如包裝完好，取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒,拆下封口膜,在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)是否正常，細(xì)胞的貼壁情況以及細(xì)胞密度,然后放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置2-3小時，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

3. 細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后，棄除培養(yǎng)瓶中大部分液體，只剩5-10ml左右培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)就可以了，超過80%匯合度時，請按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。

4. 細(xì)胞傳代

1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS 2-3ml清洗細(xì)胞一次；

2) 添加0.25%胰蛋白酶消化液約1.5ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入完全培養(yǎng)液終止消化；

3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2等適當(dāng)?shù)谋壤�進(jìn)行接種傳代，然后補充新鮮的完全培養(yǎng)基至5ml，放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4) 待細(xì)胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的完全培養(yǎng)基。

對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞|細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3)細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞|細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走)，加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。