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首頁 > ELISA試劑盒 > 土壤Elisa試劑盒>土壤蛋白酶(Protease)ELISA試劑盒

土壤蛋白酶(Protease)ELISA試劑盒

[商品編號]:HB091-QT

[CAS]:無

[英文名稱]:

[分子式]:

[分子量]:[品  牌]:上海恒遠

[庫  存]: 500 個

[數(shù)  量]:

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產(chǎn)品描述

【產(chǎn)品文獻支持】
影響因子(IF)=7.08;Enhancing methane production of anaerobic sludge digestion by microaeration: Enzyme activity stimulation, semi-continuous reactor validation and microbial community analysis;上海電力大學;《Bioresource Technology》

土壤蛋白酶(Protease)ELISA試劑盒
本試劑盒僅供研究使用。    
檢測范圍: 1.2IU/L –45 IU/L                                                        
規(guī)格: 96T
 
使用目的:
本試劑盒用于測定土壤樣本中蛋白酶(Pro)的活性。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中蛋白酶(Pro)水平。用純化的蛋白酶(Pro)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入蛋白酶(Pro),再與HRP標記的蛋白酶(Pro)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的蛋白酶(Pro)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中蛋白酶(Pro)活性濃度。
試劑盒組成
1
30倍濃縮洗滌液
20ml×1瓶
7
終止液
6ml×1瓶
2
酶標試劑
6ml×1瓶
8
標準品(80IU/L)
0.5ml×1瓶
3
酶標包被板
12孔×8條
9
標準品稀釋液
1.5ml×1瓶
4
樣品稀釋液
6ml×1瓶
10
說明書
1份
5
顯色劑A液
6ml×1瓶
11
封板膜
2張  
6
顯色劑B液
6ml×1/瓶
12
密封袋
1個
標本要求 
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
40IU/L
5號標準品
150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
20IU/L
4號標準品
150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
10IU/L
3號標準品
150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
5IU/L
2號標準品
150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
2.5IU/L
1號標準品
150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
 
 
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白孔調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
操作程序總結(jié):
 
 
計算
  以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。
注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線,最好做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
 
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個月
 

 

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