[商品編號(hào)]:無(wú)
[CAS]:無(wú)
[英文名稱(chēng)]:
[分子式]:
[分子量]:[品 牌]:恒遠(yuǎn)生物
[庫(kù) 存]: 100 盒
保存:4℃密封避光保存,有效期一年。
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
Cell Counting Kit-8 簡(jiǎn)稱(chēng) CCK-8 試劑盒,為 MTT 法的替代方法,是一種基于WST(水溶性四唑鹽,化學(xué)名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽) 的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測(cè)試劑盒。可用于藥物篩選、細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定、腫瘤藥敏等試驗(yàn)
使用說(shuō)明:
一、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)(測(cè)定細(xì)胞具體數(shù)量時(shí))
1、先用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)所制備的細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)量,然后接種細(xì)胞。
2、按比例依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個(gè)細(xì)胞濃度梯度,一般要做 3-5 個(gè)細(xì)胞濃度梯度,
每組 3-6 個(gè)復(fù)孔。
3、接種后培養(yǎng)至細(xì)胞貼壁,然后加CCK-8 試劑培養(yǎng)一定時(shí)間后測(cè)定OD 值,制作出一條以細(xì)胞數(shù)量為橫坐標(biāo)(X 軸),OD 值為縱坐標(biāo)(Y 軸)的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)可以測(cè)定出未知樣品的細(xì)胞數(shù)量(試用此標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的前提是實(shí)驗(yàn)的條件要一致,便于確定細(xì)胞的接種數(shù)量以及加入CCK-8 后的培養(yǎng)時(shí)間。)
二、細(xì)胞活性檢測(cè)
1、在 96 孔板中接種細(xì)胞懸液(100μL/孔)。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)(在 37℃,5% CO2 的條件下)。
2、向每孔加入 10μL CCK-8 溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會(huì)影響OD 值的讀
數(shù))。
3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 1-4 小時(shí)。
4、用酶標(biāo)儀測(cè)定在 450nm 處的吸光度。
5、如果暫時(shí)不測(cè)定OD 值,打算以后測(cè)定的話(huà),可以向每孔中加入 10μL 0.1M 的HCl 或者 1%SDS(W/V)溶液,并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在 24 小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化。
三、細(xì)胞增值-毒性檢測(cè)
1、在 96 孔板中配置 100 μL 的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng) 24 小時(shí)(在 37 ℃,
5% CO2 的條件下)。
2、向培養(yǎng)板加入 10μL 不同濃度的待測(cè)物質(zhì)。在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間(例如:6、
12、24 或 48 小時(shí))。
3、 向每孔加入 10 μL CCK-8 溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會(huì)影響 OD 值的讀數(shù))。如果待測(cè)物質(zhì)有氧化性或還原性的話(huà),可在加 CCK-8 之前更換新鮮培養(yǎng)基(除去培養(yǎng)基,并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,然后加入新的培養(yǎng)基),去掉藥物影響。
4、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 1-4 小時(shí)。
5、用酶標(biāo)儀測(cè)定在 450 nm 處的吸光度。
6、如果暫時(shí)不測(cè)定OD 值,打算以后測(cè)定的話(huà),可以向每孔中加入 10μL 0.1M 的HCl 或者 1%SDS(W/V)溶液,并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在 24 小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化。
活力計(jì)算:.
細(xì)胞活力(%)=[A(加藥)-A(空白)]/[ A(0 加藥)-A(空白)]×100 A(加藥):具有細(xì)胞、CCK-8 溶液和藥物溶液的孔的吸光度A(空白):具有培養(yǎng)基和CCK-8 溶液而沒(méi)有細(xì)胞的孔的吸光度
A(0 加藥):具有細(xì)胞、CCK-8 溶液而沒(méi)有藥物溶液的孔的吸光度細(xì)胞活力:細(xì)胞增殖活力或細(xì)胞毒性活力
注意事項(xiàng):
①建議先做幾個(gè)孔摸索接種細(xì)胞的數(shù)量和加入CCK-8 試劑后的培養(yǎng)時(shí)間。
②白細(xì)胞可能需要培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間。
③當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn) 96 孔板時(shí),貼壁細(xì)胞的最小接種量至少為 1 ,000 個(gè)/孔 (100 μL 培養(yǎng)基)。檢測(cè)白細(xì)胞時(shí)的靈敏度相對(duì)較低,因此推薦接種量不低于 2,500 個(gè)/孔 ( 100 μL 培養(yǎng)基)。如果要使用 24 孔板或 6 孔板實(shí)驗(yàn),請(qǐng)先計(jì)算每孔相應(yīng)的接種量,并按照每孔培養(yǎng)基總體積的 10% 加入CCK-8 溶液。
④如果沒(méi)有 450nm 的濾光片,可以使用吸光度在 430-490 nm 之間的濾光片,但是 450nm
檢測(cè)靈敏度最高。
⑤培養(yǎng)基中酚紅的吸光度可以在計(jì)算時(shí),通過(guò)扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不會(huì) 對(duì)檢測(cè)造成影響。
CCK-8 法與其它檢測(cè)方法之間的比較:
細(xì)胞計(jì)數(shù)方法 |
MTT 法 |
XTT 法 |
WST-1 法 |
CCK-8 法 |
形成的 formazan 的水溶性 |
差 |
好 |
好 |
好 |
產(chǎn)品性狀 |
粉末 | 2 瓶溶液 |
溶液 | 1 瓶溶液 |
使用方法 |
配成溶液使用 |
現(xiàn)配現(xiàn)用 |
無(wú)需預(yù)制 |
無(wú)需預(yù)制 |
檢測(cè)靈敏度 | 高 | 很高 | 很高 | 高 |
檢測(cè)時(shí)間 |
較長(zhǎng) |
較短 |
較短 |
最短 |
檢測(cè)波長(zhǎng) | 560-600nm | 420-480nm | 420-480nm | 430-490nm |
細(xì)胞毒性 |
高,細(xì)胞形態(tài)完全消失 |
很低,細(xì)胞形態(tài)不變 |
很低,細(xì)胞形態(tài)不變 |
很低,細(xì)胞形態(tài)不變 |
試劑穩(wěn)定性 | 一般 | 較差 | 一般 | 很好 |
大批量樣品檢測(cè) |
可以 |
非常適合 |
非常適合 |
非常適合 |
便捷程度 |
一般 |
便捷 |
便捷 |
非常便捷 |
文檔名稱(chēng)
文檔類(lèi)型
文件大小
小鼠酮體(KB)ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)
(pdf)
201 KB
小鼠髓樣分化蛋白-2(MD2)ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)
(doc)
183 KB
大鼠膽酸(CA)ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)
(pdf)
201 KB
雞雌二醇(E2)ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)
(pdf)
201 KB
人乙醛脫氫酶(ALDH)ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)
(pdf)
201 KB
小鼠組織蛋白酶B(Cath-B)ELISA試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
(pdf)
201 KB
豬脂肪酶(Lipase)ELISA試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
(pdf)
201 KB
小鼠腸三葉因子(ITF)ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)
(pdf)
201 KB
人層粘連蛋白(LN)ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)
(pdf)
201 KB
人β淀粉酶(β-amylase)ELISA試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
(doc)
184 KB
關(guān)注恒遠(yuǎn)生物科技
上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司 公司地址:上海市松江臨港科技城漢橋文化科技園B座603 郵政編碼:201615 郵箱:2881726255@qq.com
聯(lián)系人:李經(jīng)理 聯(lián)系電話(huà):18221656311滬ICP備11004148號(hào)-24 技術(shù)支持:阿儀網(wǎng)