微量法100T/96S
注 意:正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義:
GR是廣泛存在于真核和原核生物中的一種黃素蛋白氧化還原酶,是谷胱甘肽氧化還原循環(huán)的關(guān)鍵酶之一(通常昆蟲中GR被TrxR取代)。GR催化NADPH還原GSSG生成GSH,有助于維持體內(nèi)GSH/GSSG比值。GR在氧化脅迫反應(yīng)中對活性氧清除起關(guān)鍵作用,此外GR還參與抗壞血酸-谷胱甘肽循環(huán)途徑。
測定原理:
GR能催化NADPH還原GSSG再生GSH,同時NADPH脫氫生成NADP+;NADPH在340 nm有特征吸收峰,相反NADP+在該波長無吸收峰;通過測定340 nm吸光度下降速率來測定NADPH脫氫速率,從而計算GR活性。
自備儀器和用品:
低溫離心機、水浴鍋、移液器、紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、和蒸餾水
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