α-酮戊二酸（αKA）ELISA試劑盒

[商品編號]:HB099-SH

[CAS]：無

[英文名稱]：

[分子式]：

[分子量]：[品　　牌]：恒遠生物

[庫　　存]： 500 盒

產(chǎn)品描述

使用目的：

本試劑盒用于測定樣本中α-酮戊二酸（αKA）的含量。

實驗原理

本試劑盒應用酶聯(lián)免疫競爭法測定標本中α-酮戊二酸（αKA）水平。用純化的α-酮戊二酸（αKA）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中加入α-酮戊二酸（αKA），和 HRP 標記的α-酮戊二酸（αKA）抗原，使它們競爭結合，，經(jīng)過徹底洗滌后加底物 TMB 顯色。樣本顏色的深淺和樣品中的α-酮戊二酸（αKA）的含量呈負相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中α-酮戊二酸（αKA）的含量。

操作步驟

1. 加樣：分別設標準孔、空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上標準孔中加 50 微升，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl（樣品最終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

2. 加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外。

3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 60 分鐘。

4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此重復 5 次，拍干。

6. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15 分鐘.

7. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

8. 測定：以空白孔調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進行。