【產(chǎn)品名稱】：魚類皮質(zhì)醇(Cortisol)ELISA試劑盒

【產(chǎn)品用途】：被測(cè)樣品定性定量分析

【產(chǎn)品規(guī)格】：96T/48T(兩種規(guī)格)

【檢測(cè)方法】：酶免法/酶聯(lián)免疫法(ELISA)

【保存條件】：2-8℃

【供 貨 期】：1-3天(現(xiàn)貨供應(yīng))

【產(chǎn)品性狀】：液體盒裝

【產(chǎn)品價(jià)格】：電議(含稅含運(yùn)費(fèi)，我們?nèi)�程提�?/font>ELISA實(shí)驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)和ELISA試劑盒免費(fèi)代測(cè))

【ELISA檢測(cè)試劑盒種屬】：鹿、羊、雞、鴨、狼、魚、馬、牛、人、大鼠、犬、小鼠、豚鼠、倉(cāng)鼠、裸鼠、馬鈴薯、兔子、豬、猴等動(dòng)植物。

【銷售優(yōu)勢(shì)】：價(jià)格行業(yè)優(yōu)勢(shì)、質(zhì)量可靠、如果出現(xiàn)客觀質(zhì)量問題包換退

【待檢樣本】：體液、血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液、組織勻漿、心房水標(biāo)本等

樣品采集：收集標(biāo)本前必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定。對(duì)收集后當(dāng)天進(jìn)行檢測(cè)的標(biāo)本，儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆茫�如有特殊原因需要周期收集�?biāo)本，將標(biāo)本及時(shí)分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反復(fù)凍融。標(biāo)本2-8℃可保存48小時(shí)，-20℃可保存1個(gè)月。-70℃可保存6個(gè)月。部分激素類標(biāo)本需添加抑肽酶。

【產(chǎn)品保質(zhì)期】：半年(六個(gè)月) 

實(shí)驗(yàn)原理：

結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體與受檢標(biāo)本（抗原或抗體）起反應(yīng)。用洗滌的方法洗去未結(jié)合的抗原或抗體。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。根據(jù)實(shí)際的應(yīng)用方法，可以分成以下幾種：

雙抗夾心 ELISA：將捕獲抗體包被在固相載體上，封閉后加入待檢抗原，溫育后加入酶標(biāo)檢測(cè)抗體，捕獲抗體和檢測(cè)抗體可以是針對(duì)不同表位的兩種單抗，也可以是針對(duì)同一抗原的一種單抗與一種多抗，但是檢測(cè)抗體需要經(jīng)過酶標(biāo)。

競(jìng)爭(zhēng)ELISA：用待檢抗原或抗體去干擾已經(jīng)預(yù)先設(shè)計(jì)好的體系，終顯色的結(jié)果與待檢抗原或抗體的干擾程度成負(fù)相關(guān)。主要應(yīng)用于只有一個(gè)抗原表位的蛋白檢測(cè)。

多因子ELISA檢測(cè)技術(shù)：多重ELISA芯片技術(shù)通過在96孔板的每個(gè)孔中以陣列的形式植入1~25種捕獲抗體，隨后像ELISA一樣操作，通過化學(xué)發(fā)光(HRP酶)和熒光燃料(紅外)來(lái)檢測(cè)。

受刺激的細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子是短暫的，并且不同細(xì)胞因子基因表達(dá)的動(dòng)力學(xué)是變化的。通過ELISA實(shí)驗(yàn)只能檢測(cè)到的免疫反應(yīng)性的細(xì)胞因子蛋白的含量，而這并不能完全代表細(xì)胞因子的生物活性的水平。例如，使用抗細(xì)胞因子抗體的一種ELISA不能區(qū)別如TGF-β1的細(xì)胞因子蛋白是無(wú)活性的前體形式還是有活性的成熟蛋白。此外，一種ELISA可以檢測(cè)部分降解的細(xì)胞因子蛋白，它們?nèi)杂忻庖叻磻?yīng)性（例如至少可識(shí)別兩個(gè)表位），當(dāng)時(shí)它可能卻喪失了它們的生物學(xué)活性。

試劑盒組成 

魚類皮質(zhì)醇(Cortisol)ELISA試劑盒標(biāo)本要求 

1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。 

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

魚類皮質(zhì)醇(Cortisol)ELISA試劑盒操作程序總結(jié)：

計(jì)算

  以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。