產(chǎn)品名稱：人骨成型蛋白2(BMP-2)ELISA試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：96T/48T
保存條件：2-8℃.
產(chǎn)品庫存：現(xiàn)貨供應(yīng)
檢測目的：用于測定血清，血漿及相關(guān)液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本.
檢測種屬：大小鼠、人、豚鼠、兔子、豬、犬、牛羊、雞鴨elisa試劑盒等種屬
檢測方法：酶聯(lián)免疫法/酶免法（elisa）
適用范圍：僅供科研使用，不得用于臨床
供應(yīng)廠家：上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司
產(chǎn)品價(jià)格：價(jià)格優(yōu)惠，歡迎來電洽談！
ELISA試劑盒預(yù)期應(yīng)用：ELISA法定量測定血清、血漿、組織勻漿或其它相關(guān)生物液體中目標(biāo)蛋白含量。
ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理：用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或者標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗體、HRP標(biāo)記的親和素，經(jīng)過徹底洗滌后用底物顯色。底物在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品濃度呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定OD值，計(jì)算樣品濃度。

人骨成型蛋白2(BMP-2)ELISA試劑盒組成：

ELISA試劑盒常見系列:IL白介素系列，IFN干擾素系列、TNF腫瘤壞死因子系列、生長因子系列、免疫球蛋白系列、細(xì)胞粘附分子系列、MMP系列等等。所有試劑盒經(jīng)過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，保證有效且重復(fù)性佳。

“人骨成型蛋白2(BMP-2)ELISA試劑盒”操作步驟
實(shí)驗(yàn)開始前，請(qǐng)?zhí)崆芭渲煤盟�有試劑，試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。每次檢測都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如樣品濃度過高時(shí)，用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。
1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔�？瞻卓准訕悠废♂屢�100μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。
為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物素標(biāo)記抗體工作液 100μl(取1μl生物素標(biāo)記抗體加99μl生物素標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時(shí)內(nèi)配制)，37℃,60分鐘。
3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。
4. 每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液(同生物素標(biāo)記抗體工作液) 100μl，37℃，60分鐘。
5. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。
6. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色(30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行檢測。
注：
1. 用戶在初次使用試劑盒時(shí)，應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘，以便試劑集中到管底。
2. 每次實(shí)驗(yàn)留一孔作為空白調(diào)零孔，該孔不加任何試劑，只是后加底物溶液及2N H2SO4。測量時(shí)先用此孔調(diào)OD值至零。
3. 為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜。
4. 未使用完的酶標(biāo)板或者試劑，請(qǐng)于2-8℃保存。標(biāo)準(zhǔn)品、生物素標(biāo)記抗體工作液、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配置使用。請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、生物素標(biāo)記抗體工作液或、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液。
5. 建議檢測樣品時(shí)均設(shè)雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制要點(diǎn)
許多試劑檢測都涉及到標(biāo)準(zhǔn)曲線的問題，標(biāo)準(zhǔn)曲線做的好與壞會(huì)直接影響到實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，甚至是關(guān)系到實(shí)驗(yàn)的成敗，那么究竟如何繪制或制作標(biāo)準(zhǔn)曲線呢？
首先我們需要了解下標(biāo)準(zhǔn)曲線中的問題：
標(biāo)準(zhǔn)曲線不正確
標(biāo)準(zhǔn)品凍干粉溶解體積錯(cuò)誤
確保凍干粉用正確的體積溶解，溶解體積在說明書或小瓶上標(biāo)有。
溶解時(shí)間太短
確保溶解時(shí)間足夠長讓凍干粉充分溶解。
濃縮標(biāo)準(zhǔn)品稀釋錯(cuò)誤
確保濃縮標(biāo)準(zhǔn)品根據(jù)說明書要求正確稀釋。
材料/預(yù)稀釋液保存有誤
標(biāo)準(zhǔn)液和預(yù)稀釋液的保存按照說明書要求。
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋時(shí)不正確混勻
濃縮標(biāo)準(zhǔn)品連續(xù)稀釋并正確混勻。
檢測波長錯(cuò)誤
確保檢測時(shí)光度計(jì)的波長是正確的。
使用其他試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)品
只能用試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品做實(shí)驗(yàn)，不能用其他試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)品替代。
其次做標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品檢測時(shí)有幾個(gè)問題需要注意
1、樣品的濃度等指標(biāo)是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出來的，所以首先要把做標(biāo)準(zhǔn)曲線看作是比做正式實(shí)驗(yàn)還要重要的一件事，否則后面的實(shí)驗(yàn)結(jié)果無從談起。
2、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品的標(biāo)準(zhǔn)濃度范圍要有一個(gè)比較大的跨度，并且要能涵蓋你所要檢測實(shí)驗(yàn)樣品的濃度，即樣品的濃度要在標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度范圍之內(nèi)，包括上限和下限。而對(duì)于呈S型的標(biāo)準(zhǔn)曲線，盡量要使實(shí)驗(yàn)樣品的濃度在中間坡度陡段，即曲線幾乎成直線的范圍內(nèi)。
3、好采用倍比稀釋法配制標(biāo)準(zhǔn)曲線中的標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度，這樣就能夠保證標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度不會(huì)出現(xiàn)較大的偏離。
4、檢測標(biāo)準(zhǔn)樣品時(shí)，應(yīng)按濃度遞增順序進(jìn)行，以減少高濃度對(duì)低濃度的影響，提高準(zhǔn)確性。
5、標(biāo)準(zhǔn)曲線的樣品數(shù)一般為7個(gè)點(diǎn)，但至少要保證有5個(gè)點(diǎn)。
6、做出的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)因?qū)嶒?yàn)要求不同而有所變動(dòng)，但一般來說，相關(guān)系數(shù)R至少要大于0.98，對(duì)于有些實(shí)驗(yàn)，至少要0.99甚至是0.999.
根據(jù)我司解決方案選擇什么方程去擬合
    用于免疫檢測的所謂“標(biāo)準(zhǔn)曲線”其實(shí)稱為擬合曲線比較合適。免疫檢測時(shí)標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)（可以是倍比稀釋的，也可以不是）濃度如果和相應(yīng)的吸光度（OD）值如果能夠呈現(xiàn)直線關(guān)系當(dāng)然是理想的了，這時(shí)可以通過EXELL等方便的獲得擬合曲線，進(jìn)而推算出樣品的濃度值。但我們做免疫檢測很少有時(shí)候能夠有這么理想的情況，標(biāo)品濃度和相應(yīng)OD值往往是"S"型的曲線關(guān)系，這時(shí)就不能用直線擬合的方式了，而對(duì)擬合方法進(jìn)行選擇就是必要的了。
關(guān)于標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合方式，直線、二次曲線、三次曲線、指數(shù)、對(duì)數(shù)等雖都可用于ELISA及其它生物學(xué)反應(yīng)中的曲線擬合，但都只適用于曲線的一部分，有的適用于前半段，有的適用于后半段，有的適用于中間一段，而Logistic曲線則對(duì)曲線的全部都有較好的適用性。當(dāng)然，如果用于定量，還是在中間一段較好。這些方法雖然沒有一種方法可以通用，但也都可以用。關(guān)鍵在于你的標(biāo)準(zhǔn)曲線做到了S形的哪一部分，你想檢測的樣品濃度在曲線的哪一部分。在S曲線的低濃度部分可以用乘冪方程很好的擬合，中低濃度部分可以用直線方程，中間部分可用對(duì)數(shù)方程，而中后段可用四參數(shù)。
    目前國際上流行的免疫檢測擬合方式是“四參數(shù)邏輯擬合”，用這種擬合方式往往能夠比較精確的反映濃度和吸光度的曲線關(guān)系，從而進(jìn)一步比較正確的獲得樣品中待測物質(zhì)的濃度值。
    其實(shí)，在一個(gè)長的區(qū)間內(nèi)，Logistic應(yīng)該都能擬合得較為理想。但并不是說它就是萬能的。事實(shí)上不僅是ELISA，其它很多生物學(xué)反應(yīng)都是S形曲線，也都可以用Logistic曲線擬合。但建模型是一回事，而用它來定量是另一回事。如果用來定量，S形曲線的中間段（較陡處）是比較好的，而兩端的平坦部分計(jì)算誤差會(huì)大，有時(shí)甚至?xí)�很大�?nbsp;
“人骨成型蛋白2(BMP-2)ELISA試劑盒”可檢測樣本：血液標(biāo)本，組織液標(biāo)本，尿液標(biāo)本，糞便標(biāo)本，腦脊液標(biāo)本，胸腹水標(biāo)本等（具體詳細(xì)情況請(qǐng)咨詢）。