人纖連蛋白(FN)ELISA試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

檢測范圍：                                                         96T

10ng/L - 240ng/L

人纖連蛋白(FN)ELISA試劑盒使用目的：

本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中纖連蛋白含量。

實(shí)驗(yàn)原理

ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理：用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或者標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗體、HRP標(biāo)記的親和素，經(jīng)過徹底洗滌后用底物顯色。底物在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品濃度呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定OD值，計(jì)算樣品濃度。

試劑盒組成 

標(biāo)本要求 

1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。 

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

人纖連蛋白(FN)ELISA試劑盒計(jì)算

  以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。 

注意事項(xiàng)

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時間好控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4． 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計(jì)算時請后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。

7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用。

酶聯(lián)免疫（ELISA）送檢服務(wù)

實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目：酶聯(lián)免疫（ELISA）指標(biāo)檢測

客戶提供材料：人/動物等的血清、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)液或人/動植物等組織、細(xì)胞樣本

周期：2-3周（視樣本數(shù)而定）

提交結(jié)果：實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)報(bào)告（吸光度值及計(jì)算結(jié)果）

服務(wù)報(bào)價(jià)：酶聯(lián)免疫（ELISA）試劑盒價(jià)格（組織/細(xì)胞樣本還須加收勻漿費(fèi)用以及總蛋白定量檢測費(fèi)用）

一、計(jì)算原則：

酶聯(lián)免疫（ELISA）試劑盒分為96T與48T兩種規(guī)格

96T規(guī)格可做到85個樣本， 48T規(guī)格可做到37個樣本，留11孔用作標(biāo)準(zhǔn)曲線

特別提醒：如客戶自行提供酶聯(lián)免疫ELISA試劑盒，則手工費(fèi)按元/盒收�。ㄒ晫�(shí)驗(yàn)難易程度）。

二、樣本提供:

人或動物等的血清、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)液所需樣本量不少于100ul；

人或動植物等組織樣本量不少于50mg；

細(xì)胞樣本量不少于106以上。

三、注意事項(xiàng)：

酶聯(lián)免疫指標(biāo)要分清種屬、規(guī)格，指標(biāo)的中文名稱與英文簡稱

血清、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)液或上清液樣本直接計(jì)算檢測價(jià)格

組織樣本或測定細(xì)胞內(nèi)容物的樣本，除測定指標(biāo)外，還必須加勻漿費(fèi)用以及總蛋白定量檢測。

人纖連蛋白(FN)ELISA試劑盒保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個月