人凋亡相關(guān)因子配體(FASL)ELISA試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍: 96T
10ng/L - 240ng/L
使用目的:
本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中凋亡相關(guān)因子配體含量。
實驗原理
ELISA試劑盒實驗原理:用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被抗體的微孔中依次加入標本或者標準品、生物素化的抗體、HRP標記的親和素,經(jīng)過徹底洗滌后用底物顯色。底物在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品濃度呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定OD值,計算樣品濃度。
試劑盒組成
1 | 20倍濃縮洗滌液 | 20ml×1瓶 | 7 | 終止液 | 3ml×1瓶 |
2 | 酶標試劑 | 3ml×1瓶 | 8 | 標準品(480ng/L) | 0.5ml×1瓶 |
3 | 酶標包被板 | 12孔×4條 | 9 | 標準品稀釋液 | 1.5ml×1瓶 |
4 | 樣品稀釋液 | 3ml×1瓶 | 10 | 說明書 | 1份 |
5 | 顯色劑A液 | 3ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2張 |
6 | 顯色劑B液 | 3ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1個 |
標本要求
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
240ng/L | 5號標準品 | 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液 |
120ng/L | 4號標準品 | 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
60ng/L | 3號標準品 | 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
30ng/L | 2號標準品 | 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
15ng/L | 1號標準品 | 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
計算
以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。
注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間好控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線,好做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
酶聯(lián)免疫(ELISA)送檢服務(wù)
實驗項目:酶聯(lián)免疫(ELISA)指標檢測
客戶提供材料:人/動物等的血清、尿液、細胞培養(yǎng)液或人/動植物等組織、細胞樣本
周期:2-3周(視樣本數(shù)而定)
提交結(jié)果:實驗數(shù)據(jù)報告(吸光度值及計算結(jié)果)
服務(wù)報價:酶聯(lián)免疫(ELISA)試劑盒價格(組織/細胞樣本還須加收勻漿費用以及總蛋白定量檢測費用)
一、計算原則:
酶聯(lián)免疫(ELISA)試劑盒分為96T與48T兩種規(guī)格
96T規(guī)格可做到85個樣本, 48T規(guī)格可做到37個樣本,留11孔用作標準曲線
特別提醒:如客戶自行提供酶聯(lián)免疫ELISA試劑盒,則手工費按元/盒收。ㄒ晫嶒炿y易程度)。
二、樣本提供:
人或動物等的血清、尿液、細胞培養(yǎng)液所需樣本量不少于100ul;
人或動植物等組織樣本量不少于50mg;
細胞樣本量不少于106以上。
三、注意事項:
酶聯(lián)免疫指標要分清種屬、規(guī)格,指標的中文名稱與英文簡稱
血清、尿液、細胞培養(yǎng)液或上清液樣本直接計算檢測價格
組織樣本或測定細胞內(nèi)容物的樣本,除測定指標外,還必須加勻漿費用以及總蛋白定量檢測。
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個月
文檔名稱
文檔類型
文件大小
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