人苗條素受體(LR/Ob-R)ELISA試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

檢測范圍：                                                         96T

10ng/L - 240ng/L

使用目的：

本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中苗條素受體含量。

實驗原理

ELISA試劑盒實驗原理：用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗體的微孔中依次加入標本或者標準品、生物素化的抗體、HRP標記的親和素，經過徹底洗滌后用底物顯色。底物在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品濃度呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定OD值，計算樣品濃度。

試劑盒組成 

標本要求 

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

人苗條素受體(LR/Ob-R)ELISA試劑盒操作步驟

1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。 

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

計算

  以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。 

注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間好控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

4． 請每次測定的同時做標準曲線，好做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請后乘以總稀釋倍數（×n×5）。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用。

酶聯免疫（ELISA）送檢服務

實驗項目：酶聯免疫（ELISA）指標檢測

客戶提供材料：人/動物等的血清、尿液、細胞培養(yǎng)液或人/動植物等組織、細胞樣本

周期：2-3周（視樣本數而定）

提交結果：實驗數據報告（吸光度值及計算結果）

服務報價：酶聯免疫（ELISA）試劑盒價格（組織/細胞樣本還須加收勻漿費用以及總蛋白定量檢測費用）

一、計算原則：

酶聯免疫（ELISA）試劑盒分為96T與48T兩種規(guī)格

96T規(guī)格可做到85個樣本， 48T規(guī)格可做到37個樣本，留11孔用作標準曲線

特別提醒：如客戶自行提供酶聯免疫ELISA試劑盒，則手工費按元/盒收�。ㄒ晫嶒炿y易程度）。

二、樣本提供:

人或動物等的血清、尿液、細胞培養(yǎng)液所需樣本量不少于100ul；

人或動植物等組織樣本量不少于50mg；

細胞樣本量不少于106以上。

三、注意事項：

酶聯免疫指標要分清種屬、規(guī)格，指標的中文名稱與英文簡稱

血清、尿液、細胞培養(yǎng)液或上清液樣本直接計算檢測價格

組織樣本或測定細胞內容物的樣本，除測定指標外，還必須加勻漿費用以及總蛋白定量檢測。

人苗條素受體(LR/Ob-R)ELISA試劑盒保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個月