豚鼠端粒酶(TE)ELISA試劑盒 用途：

    本試劑盒專用于科研、而非用于臨床診斷。 

試驗原理：

用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗C3抗體的微孔中依次加入標本或標準品、生物素化的抗C3抗體、HRP標記的親和素，經(jīng)過徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的C3呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，計算樣品濃度。

試劑盒內(nèi)容及其配制

自備材料

1． 蒸餾水。

2． 加樣器：5ul、10 ul、50 ul、100 ul、200、500 u、1000lul。

3． 振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性

1． 此試劑盒的人血制品中的HbsAg、和抗HIV為陰性，但沒有實驗室可完全保證此血制品不會傳染肝炎、AIDS或其它傳染病，依據(jù)當?shù)氐陌踩珬l例處理本試劑盒里的成份及血清和血漿等樣品。

2． 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。

3． 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

4． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

豚鼠端粒酶(TE)ELISA試劑盒操作注意事項

1． 試劑應(yīng)按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄，不可保存。

2． 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。

3． 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

4． 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。

5． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

6． 洗滌酶標板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應(yīng)孔中吸水。

7． 底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。

8． 加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。

9． 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

樣品收集、處理及保存方法

1、 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3、 細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4、 保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準備

1． 標準品：標準品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準備，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行：

2． 洗滌緩沖液(20×)的稀釋：蒸餾水20倍稀釋。

操作步驟

1． 使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。

2． 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復孔的盡量做復孔。

3． 加入稀釋好后的標準品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。

4． 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作四次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

5． 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

6． 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作四次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

7． 每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育15分鐘。避免光照。

8． 取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。

9． 在450nm波長處測定各孔的OD值。

建議使用的實驗方案

結(jié)果分析

以吸光度OD值為縱坐標(Y)，相應(yīng)的IgA標準品濃度為橫坐標(X)，做得相應(yīng)的曲線，樣品的IgA含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應(yīng)的濃度。

局限

6號標準品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標準曲線無法得到精確的結(jié)果。

試劑盒性能

1． 靈敏度：小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。

2． 特異性：不與人其它細胞因子反應(yīng)。

3． 重復性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

豚鼠端粒酶(TE)ELISA試劑盒保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個月