一、詳細(xì)介紹：

【產(chǎn)品名稱】：大鼠骨橋素(OPN)ELISA試劑盒
【產(chǎn)品用途】：被測(cè)樣品定性定量分析
【產(chǎn)品規(guī)格】：96T/48T(兩種規(guī)格)
【檢測(cè)方法】：酶免法/酶聯(lián)免疫法(ELISA)
【保存條件】：2-8℃
【供 貨 期】：1-3天(現(xiàn)貨供應(yīng))
【產(chǎn)品性狀】：液體盒裝
【產(chǎn)品價(jià)格】：(含稅含運(yùn)費(fèi)，我們?nèi)�程提供ELISA實(shí)驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)和ELISA試劑盒免費(fèi)代測(cè))
【銷售優(yōu)勢(shì)】：價(jià)格行業(yè)優(yōu)勢(shì)、質(zhì)量可靠、如果出現(xiàn)客觀質(zhì)量問(wèn)題包換退
【待檢樣本】：體液、血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液、組織勻漿、心房水標(biāo)本等
【產(chǎn)品保質(zhì)期】：半年(六個(gè)月)
二、選擇及服務(wù)

我們可以根據(jù)您的應(yīng)用需要，比如在檢測(cè)范圍、種屬以及靈敏度等方面有特殊要求，而量身定制檢測(cè)試劑盒，有效控制檢測(cè)試劑成本。并可提供免費(fèi)代測(cè)。

◎應(yīng)盡量選擇正規(guī)廠家，產(chǎn)品經(jīng)相應(yīng)政府部門審核認(rèn)可，試劑應(yīng)從靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡(jiǎn)便性、安全性及經(jīng)濟(jì)性全面評(píng)價(jià)。

◎靈敏度：有二層含義，1）為試劑檢出被檢物質(zhì)的低量的能力；2）為試劑對(duì)大量樣品中陽(yáng)性檢出的能力。

◎特異性：常用交叉反應(yīng)率表示。含有與待測(cè)物相近結(jié)構(gòu)部份的物質(zhì)可能存在交叉反應(yīng)，使測(cè)定結(jié)果升高，可能導(dǎo)致假陽(yáng)性，所以交叉反應(yīng)是評(píng)價(jià)其質(zhì)量的關(guān)鍵指標(biāo)。

◎精密度：ELISA試劑一般指其批內(nèi)CV%，其值應(yīng)小于15%；定量試劑應(yīng)同時(shí)考察線性范圍。

◎準(zhǔn)確度：通過(guò)添加回收實(shí)驗(yàn)進(jìn)行評(píng)價(jià)。

◎簡(jiǎn)便性：指在不影響試劑的前三項(xiàng)指標(biāo)的前題下，實(shí)驗(yàn)和測(cè)定步驟越少越好，在定性實(shí)驗(yàn)中結(jié)果判斷簡(jiǎn)單明了，定量試驗(yàn)結(jié)果計(jì)算也應(yīng)簡(jiǎn)單。

◎安全性：指試劑對(duì)操作者和環(huán)境安全無(wú)害無(wú)傳染性。

◎經(jīng)濟(jì)性：試劑在同等質(zhì)量條件下通過(guò)大規(guī)模生產(chǎn)或技術(shù)進(jìn)步降低成本，而市場(chǎng)價(jià)格比較合理。

◎試劑評(píng)價(jià)：需要有權(quán)威的確證方法和確證的樣品進(jìn)行檢測(cè)。

三、檢測(cè)概述
大鼠骨橋素(OPN)ELISA試劑盒（酶聯(lián)接免疫吸附反應(yīng)分析）是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。 由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每加入一種試劑孵育后，可通過(guò)洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。

實(shí)際應(yīng)用中，通過(guò)不同的設(shè)計(jì)，具體的方法步驟可有多種。即：用于檢測(cè)抗體的間接法、用于檢測(cè)抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測(cè)小分子抗原或半抗原的抗原競(jìng)爭(zhēng)法等等。目前我們對(duì)客戶提供比較常用的ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法服務(wù)。
四、技術(shù)流程
雙抗體夾心法(檢測(cè)未知抗原)
1、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃ 過(guò)夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次。
2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌(同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔)。
3、加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.05ml。37℃ 孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。
4、加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
5、終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml
6、結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性。
間接法(檢測(cè)未知抗體)
1、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1-10ug/ml， 每孔加0.1ml，4℃過(guò)夜。次日洗滌3次。
2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌。(同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照)
3、加酶標(biāo)抗體：于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.05ml，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,后一遍用DDW洗滌。
4、加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
5、終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml
6、結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性。
五、樣本前處理注意事項(xiàng)

1 均質(zhì)

組織樣本:肉、肝食品類切細(xì)，用絞肉機(jī)反復(fù)絞碎，混合均勻。

水產(chǎn)樣本：去除樣品的非食用部分，食用部分切細(xì)，用均質(zhì)器均漿；原料表面較臟時(shí),需適當(dāng)用蒸餾水清洗。

蛋類：鮮蛋去殼，蛋黃和蛋白充分混勻。

水果、蔬菜類：先用水洗去泥沙，然后除去表面的水分，取食用部分。

2 振蕩提取

 將提取溶劑加入到裝有樣品的具塞容器中，振蕩，使提取溶劑與容器內(nèi)的樣品充分接觸以深入到樣本組織內(nèi)部，提取待測(cè)組分。

2.1振蕩方式：振蕩器上進(jìn)行上下、往返式振蕩、手搖式上下振蕩。

2.2 在組織樣本中加入有機(jī)溶劑之間提取時(shí)，應(yīng)邊加邊振蕩，防止組織凝結(jié)成團(tuán)，不利于提取。

3. 在用有機(jī)溶劑提取過(guò)程中，如果出現(xiàn)乳化現(xiàn)象，解決的方法有：①用細(xì)頭輕輕的攪拌，破壞乳化后，再重復(fù)離心。②再加入適量的提取劑，重新振蕩。注意離心后要保證樣本的稀釋倍數(shù)不變。

4 濃縮

 由于凈化過(guò)程中引入的溶劑，可能會(huì)降低待測(cè)組分的濃度或者不適宜直接分析，需要去除全部有機(jī)溶劑。即試劑盒前處理步驟中把樣本在60℃氮?dú)庀麓蹈�，再用�?fù)溶液溶解干燥殘留物。

濃縮方式：

 氮?dú)獯蹈沙�雜、壓縮空氣吹干除雜。

注意：

1在吹干樣本之前，用甲醇清洗針頭，防止雜質(zhì)干擾。

2在吹樣本時(shí)，針頭應(yīng)在液面上空，避免與樣本接觸，防止產(chǎn)生交叉污染。

3樣本吹干后應(yīng)立即取下，避免吹的時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，影響終檢測(cè)結(jié)果。

4不同的藥物，吹干后樣本的保質(zhì)期不同，提倡待樣本回到室溫后立即復(fù)溶。

5 凈化

 經(jīng)過(guò)提取的待測(cè)組分中通常含有一些會(huì)干擾試劑盒中抗原抗體反應(yīng)的雜質(zhì)或者是含有與待測(cè)物結(jié)構(gòu)相似的雜質(zhì)。將待測(cè)組分與雜質(zhì)分離的過(guò)程，我們稱為試劑盒中樣本的凈化。在我們現(xiàn)有的試劑盒前處理方法中涉及到的常見(jiàn)的凈化是：液液分配法。

 比如：用復(fù)溶液溶解干燥殘留物之前先加入適量的正己烷，在加入正己烷和復(fù)溶液渦動(dòng)后如果出現(xiàn)乳化現(xiàn)象，可以60℃水浴加熱，至乳化現(xiàn)象消失或減弱后，加大離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心。

六、報(bào)告內(nèi)容及標(biāo)準(zhǔn)
1、大鼠骨橋素(OPN)ELISA試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線；
2、詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)步驟；
3、完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（試劑耗材，實(shí)驗(yàn)方法，實(shí)驗(yàn)結(jié)果及結(jié)果說(shuō)明）；
4、實(shí)驗(yàn)進(jìn)行階段，我公司客服人員會(huì)及時(shí)向您匯報(bào)實(shí)驗(yàn)進(jìn)程。
七、服務(wù)承諾： 
工作時(shí)間內(nèi)免費(fèi)的技術(shù)咨詢和指導(dǎo) 
為客戶提供來(lái)樣檢測(cè)服務(wù)，大限度實(shí)驗(yàn)結(jié)果的有效性(免費(fèi)代測(cè))
客戶使用我司優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品的同時(shí)，可以享受本公司完善的售后服務(wù)和技術(shù)支持。