人細(xì)胞外基質(zhì)磷酸糖蛋白(MEPE)ELISA試劑盒 實(shí)驗(yàn)原理

用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗C3抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗C3抗體、HRP標(biāo)記的親和素，經(jīng)過徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的C3呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，計(jì)算樣品濃度。
試劑盒組成 
120倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液3ml×1瓶
2酶標(biāo)試劑3ml×1瓶8標(biāo)準(zhǔn)品（384ng/L）0.5ml×1瓶
3酶標(biāo)包被板12孔×4條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶
4樣品稀釋液3ml×1瓶10說明書1份
5顯色劑A液3ml×1瓶11封板膜2張 
6顯色劑B液3ml×1/瓶12密封袋1個(gè)
標(biāo)本要求 

液體類標(biāo)本

標(biāo)本必須為液體，不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血漿。每個(gè)標(biāo)本量收集體積＝100ul×檢測種類。取材前須向銷售人員索要說明書。

血清：

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

血漿：

應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，加入10％(v/v)抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1% heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

尿液、胸腹水、腦脊液：

用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

細(xì)胞培養(yǎng)上清：

檢測分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

組織標(biāo)本：

切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，緩沖液中可加入1μg/L蛋白酶抑制劑或50U/ml的Aprotinin(抑肽酶)。用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清置于-20度或- 70度保存，如有必要，可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

注：以上標(biāo)本置4℃保存應(yīng)小于1周，-20℃或-80℃均應(yīng)密封保存，-20℃不應(yīng)超過1個(gè)月，-80℃不應(yīng)超過2個(gè)月；標(biāo)本溶血會(huì)影響后檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測。
 操作步驟

用于檢測未知抗體的間接法：

用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃過夜。次日洗滌3次。

 　　↓ 　　

加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌。（同時(shí)做空白、陰性及陽性孔對照）

 　　↓ 　　

于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體（抗抗體）0.1ml， 　　37℃孵育30-60分鐘，洗滌,后一遍用DDW洗滌。

 　　↓

加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。 

     ↓

終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。

     ↓

結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。

人細(xì)胞外基質(zhì)磷酸糖蛋白(MEPE)ELISA試劑盒 操作程序總結(jié)：

實(shí)驗(yàn)注明：

1.  試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實(shí)驗(yàn)操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。

2.   加樣：加樣或加試劑時(shí)，請注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時(shí)，第一個(gè)孔與后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大，將會(huì)導(dǎo)致不同的 “預(yù)孵育"時(shí)間，從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時(shí)間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。

3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作，任何時(shí)侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)間和溫度。

4.   洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。

5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時(shí)離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請精確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時(shí)，一次不要小于10μl)，以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。

6.  反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。

7.  底物：底物請避光保存，在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。

    建議檢測樣品時(shí)均設(shè)雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

    如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定，計(jì)算時(shí)請后乘以稀釋倍數(shù)。

售后咨詢問題

一、為什么我已經(jīng)提交退款但還是沒有收到？ 

    提現(xiàn)失敗，需要充值退回的款項(xiàng)是原路返回的，從哪張卡上支出就會(huì)退回到哪張卡上，不能退到其他的銀行卡上。需要注意有些銀行支付時(shí)您是使用虛擬的電子支付卡支付的，充值退回也會(huì)退回到您的電子支付卡中（如招行支付卡、工行E通卡、農(nóng)行電子支付卡）。 

二、銀行賬戶重復(fù)扣款怎么辦？ 

    由于您的支付信息銀行沒有即時(shí)傳輸給我們，造成您的銀行重復(fù)扣款，我們感到非常抱歉。不過請放心，我們會(huì)在第二個(gè)工作日和銀行對帳，確認(rèn)您的匯款后，重復(fù)支付款項(xiàng)會(huì)直接充值到您的支付寶賬戶。 

三、如果我有問題或建議是否可以通過郵件向你們反饋？ 

    可以。請您將訂單號、姓名、聯(lián)系方式及相關(guān)信息寫明，發(fā)送至我司郵箱，我們會(huì)盡快為您處理問題。謝謝！ 

四、公司客服工作時(shí)間？ 

    服務(wù)時(shí)間：周一至周六8:30-17:30，服務(wù)范圍包括訂單自助查詢、訂單服務(wù)、售后服務(wù)、意見與建議。如果在非工作時(shí)間我們的客服人員未能接到您的來電，我們將在第一時(shí)間給您回電！ 

五、簽收時(shí)發(fā)現(xiàn)商品包裝破損，該如何處理？ 

    您好，商品簽收時(shí)如包裝有破損，請您直接拒收；商品簽收后如商品本身有問題，請您撥打我們的免費(fèi)熱線，我們將有專業(yè)的售后人員為您解決。 

同類產(chǎn)品推薦:

人葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(GLUT1)ELISA試劑盒
人抗原處理相關(guān)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(TAP)ELISA試劑盒
人尿蛋白(UP)ELISA試劑盒
人低分子質(zhì)量蛋白7/β型蛋白酶體9(LMP7/PSMB9)ELISA試劑盒
人腦啡肽(ENK)ELISA試劑盒
人免疫抑制酸性蛋白(IAP)ELISA試劑盒
人麥角蛋白IgA(Gliadin-IgA)ELISA試劑盒
人發(fā)動(dòng)蛋白2(DNM2)ELISA試劑盒 
人可溶性血纖蛋白單體復(fù)合物(SFMC)ELISA試劑盒
人抗組蛋白抗體(AHA)ELISA試劑盒
人抗膠原蛋白抗體(CLA)ELISA試劑盒
人抗角蛋白絲聚集素/絲集蛋白抗體(AFA)ELISA試劑盒
人膠原蛋白Ⅱ(HCBⅡ)ELISA試劑盒
人抗環(huán)胍氨酸肽抗體(CCP)ELISA試劑盒
人抗小核糖核蛋白/Sm抗體(snRNP/Sm)ELISA試劑盒
人著絲粒蛋白B(CENP-B)ELISA試劑盒
人抗脫氧核糖核蛋白抗體(DNP-Ab)ELISA試劑盒
人巨噬細(xì)胞刺激蛋白(MSP)ELISA試劑盒
人精氨酸酶(Arg)ELISA試劑盒
 

人細(xì)胞外基質(zhì)磷酸糖蛋白(MEPE)ELISA試劑盒使用說明書我們將以高度的責(zé)任感和出色的產(chǎn)品質(zhì)量為客戶提供高品質(zhì)的產(chǎn)品和實(shí)驗(yàn)技術(shù)解決方案。豐富的經(jīng)驗(yàn)、優(yōu)良的品質(zhì)、充足的庫存、準(zhǔn)確的交貨時(shí)間、極具競爭力的價(jià)格，所有這些保證了我們向您提供的專業(yè)優(yōu)質(zhì)的服務(wù)。優(yōu)惠促銷，所有ELISA試劑盒均以超低折扣價(jià)讓利客戶，全程免費(fèi)技術(shù)指導(dǎo)，提供免費(fèi)代測服務(wù)，歡迎新老客戶來電咨詢詳情。