一.參數(shù)規(guī)格
【產(chǎn)品名稱】:人纖溶酶/纖維蛋白溶酶(PL/Fbn)ELISA試劑盒
【產(chǎn)品用途】:被測樣品定性定量分析
【產(chǎn)品規(guī)格】:96T/48T(兩種規(guī)格)
【檢測方法】:酶免法/酶聯(lián)免疫法(ELISA)
【保存條件】:2-8℃
【供 貨 期】:1-3天(現(xiàn)貨供應)
【產(chǎn)品性狀】:液體盒裝
【產(chǎn)品價格】:電議(含稅含運費,我們?nèi)烫峁?/font>ELISA實驗技術指導和ELISA試劑盒免費代測)
【銷售優(yōu)勢】:價格行業(yè)優(yōu)勢、質(zhì)量可靠、如果出現(xiàn)客觀質(zhì)量問題包換退
【待檢樣本】:體液、血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液、尿液、組織勻漿、心房水標本等
【試劑盒種屬】:鹿、羊、雞、鴨、狼、魚、馬、牛、人、大鼠、犬、小鼠、豚鼠、倉鼠、裸鼠、馬鈴薯、兔子、豬、猴等動植物。
二.樣品收集、處理及保存
1).細胞培養(yǎng)上清:
適用于檢測體外培養(yǎng)的細胞分泌性成份。用無菌管收集細胞上清液,以1000×g離心15分鐘,收集上清。
2)細胞:
用PBS反復洗滌細胞3次,調(diào)整細胞濃度達到104-106/ml 左右,通過反復凍融,使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份,或者細胞超聲粉碎,離心取上清液檢測。
3)血清:
在室溫下,血液自然凝固,以1000×g離心15分鐘,取上清待測。
4)血漿:
應根據(jù)標本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合后靜置10-20 分鐘后,以1000×g離心15分鐘,收集上清。
5)體液:
包括胸腹水、腦脊液,分泌物等。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集,以1000×g離心15分鐘,收集上清。
6.)組織標本:
切取組織標本,稱取重量0.5mg,加入500ul 的PBS,用手工或勻漿器,或超聲破碎儀將標本勻漿,以2000-3000 rmp離心20 分鐘,收集上清進行檢測。
樣品中不能含有NaN3,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
7)保存:
如果樣品不能立即檢測,應將其分裝,-70 ℃保存,避免反復冷凍。保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應再次離心。血液標本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
三.ELISA試劑盒組成
產(chǎn)品組成 | 48孔配置 | 96孔配置 | Storage |
標準品:180ng/L | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 | 2-8℃ |
標準品稀釋液 | 1.5ml×1瓶 | 1.5ml×1瓶 | 2-8℃ |
酶標試劑 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃ |
樣品稀釋液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃ |
顯色劑A液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃ |
顯色劑B液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃ |
終止液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃ |
濃縮洗滌液 | (20ml×20倍)×1瓶 | (20ml×30倍)×1瓶 | 2-8℃ |
酶標包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃ |
封板膜 | 2片 | 2片 | RT |
密封袋 | 1個 | 1個 | RT |
說明書 | 1份 | 1份 | RT |
四.操作步驟
五.實驗原理
人纖溶酶/纖維蛋白溶酶(PL/Fbn)ELISA試劑盒 用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被抗體的微孔中依次加入標本或者標準品、生物素化的抗體、HRP標記的親和素,經(jīng)過徹底洗滌后用底物顯色。底物在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品濃度呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定OD值,計算樣品濃度。
實驗過程
加樣→ 孵育→ 檢測抗體→ 顯色→ 讀數(shù) →數(shù)據(jù)分析
數(shù)據(jù)處理及報告
繪制標準曲線:在Excel工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應OD值作縱坐標,繪制出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。
六.標準曲線的繪制方法 可以采用各種繪圖軟件來繪制ELISA標準曲線,我公司以“Curve Exert1.3”軟件為例,繪制的ELISA標準曲線如下:
計算:以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度
七.報告方式
◎定性試驗 國內(nèi)外為便于統(tǒng)一計算,一律按S/C.O 方式報告,S 為標本A 值,C.O 即Cut Off 值(陽性判定值)
◎夾心法和間接法以S/C.O≥1 為陽性;竟爭法與中和法以S/C.O﹤1 為陽性
◎Cut Off 的計算公式以試劑盒說明書的為準常見的有:
◎A) C.O=2.1×N(當N 不足0.05 時按0.05 計),
◎此公式由 P/N>2.1 換算而來,常用于夾心法。
◎B) C.O=0.5×N,從抑止率公式換算而來,
◎常用于竟爭,中和法
◎C) C.O=N+C(C 為常數(shù)),用于間接法。
◎D) C.O=C×P+N(C 為常數(shù)),用于間接法。此公式客觀,但對生產(chǎn)廠家要求很高,陰陽性對照測定值要基本恒定。
報告方式
定量分析 用已知量的標準品作一系列稀釋,ELISA 測定,繪制標準曲線,結(jié)果以絕對量或單位表示。ELISA 的標準曲線每次都要和待測標本做在同一塊板上。
◎現(xiàn)有的 ELISA 定量試劑盒標準曲線只有在較窄的濃度范圍內(nèi)成直線,要得到精確的結(jié)果實屬不易。因此嚴禁用定性試劑盒做定量分析。
灰區(qū)概念
把定量分析的正常值范圍引入定性分析建立灰區(qū)概念,即將CO 值上下的一段區(qū)域定為陽性可疑,需重復實驗或換試劑重測以確定其陰陽性,如仍落在灰區(qū)范圍內(nèi)則報告+(陽性);覅^(qū)概念對血站系統(tǒng)的獻血員篩查尤為重要。
人纖溶酶/纖維蛋白溶酶(PL/Fbn)ELISA試劑盒包裝:在采樣、發(fā)送、運輸過程中有保冷溫度要求的,公司均采用加厚款生物保溫箱,內(nèi)裝生物冰袋,有效的控制產(chǎn)品溫度,保證貨物質(zhì)量不受影響,同時并填充大量EPE發(fā)泡棉,具有優(yōu)越的緩沖彈性,它就像成千上萬的小彈簧緊緊地保護在郵寄物品周圍,它能有效的吸收嚴酷的沖擊力,使郵寄物品免于破損,保證貨物完好送達您手。
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