人血栓素B2(TXB2)ELISA試劑盒僅供研究使用。
詳細介紹
規(guī)格: 96T/48T
品牌:R&D BIM
種屬:人.大鼠.小鼠
檢測波長:450 nm
所需樣本體積: 50-100ul
適用范圍:僅供科研
保存及有效期:2-8℃,六個月,-20℃一年
檢測目的:用于測定血清,血漿及相關(guān)液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標本。
供應(yīng)的種屬有:大象、牛、大鼠、小鼠、人、馬、兔、大熊貓、類人猿、蜥蜴、蝌蚪、菠菜、羊、犬、魷魚、蝸牛、扁豆、豌豆、馬鈴薯、蟈蟈、豚鼠、倉鼠、金黃地鼠、鵝、鴿子、禿鷲、河馬、犀牛、野豬、東北虎、斑鳩、蚯蚓、鯉魚、眼鏡蛇、青蛙、丹頂鶴、鳥類等動植物種屬
實驗原理
ELISA試劑盒實驗原理:用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被抗體的微孔中依次加入標本或者標準品、生物素化的抗體、HRP標記的親和素,經(jīng)過徹底洗滌后用底物顯色。底物在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品濃度呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定OD值,計算樣品濃度。
試劑盒組成
1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
2 酶標試劑 6ml×1 瓶 8 標準品(
4800 pmol/L)
0.5ml×1 瓶
3 酶標包被板 12 孔×8 條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份
5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張
6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個
樣品類型
標本必須為液體,不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血漿。每個標本量收集體積=100ul×檢測種類。取材前須向銷售人員索要說明書。
樣品采集
收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當天進行檢測的標本,儲存在4℃?zhèn)溆,如有特殊原因需要周期收集標本?/span>
試劑盒的優(yōu)點
·特異性高:進行了廣泛的非特異性排查,避免了由于交叉反應(yīng)和干擾導(dǎo)致的實驗數(shù)據(jù)誤差。
·精 度 高:通過加標回收率和線性稀釋實驗,確保樣本值的準確性,精確度高于同類產(chǎn)品(較低的CV%)。
·重復(fù)性好:lot-to-lot檢測確保小的批間差異。
·可靠性強:經(jīng)優(yōu)化的試劑盒組分可有效的阻止假陽性和假陰性試驗結(jié)果。
·標準曲線:在保證精準數(shù)據(jù)的前提下提供較寬的檢測范圍,以滿足需求。
·價格低廉:原裝進口RD試劑,國內(nèi)分裝配置,大大減少了客戶因為價格高而必須購買國產(chǎn)試劑盒的顧慮。
人血栓素B2(TXB2)ELISA試劑盒實驗前的準備
1仔細閱讀說明書
2確定試劑盒在有效期內(nèi)
3按說明書確定所有試劑齊全(數(shù)量、體積)
4標本制備要規(guī)范,每份標本體積要按2-3個復(fù)孔以上的量制備(貯存),盡量分裝做備份。短期內(nèi)無法實驗者,注意低溫保存
5準備好所有實驗額外所需物品,如試管、吸頭、移液器、離心機等
6根據(jù)檢測標本數(shù)量確定所需試劑的量
7按說明書將所用試劑平衡至室溫,配制所需試劑
操作步驟
1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
2400 pmol/L 5 號標準品 150μl 的原倍標準品加入150μl 標準品稀釋液
1200 pmol/L 4 號標準品 150μl 的5 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
600 pmol/L 3 號標準品 150μl 的4 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
300 pmol/L 2 號標準品 150μl 的3 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
150 pmol/L 1 號標準品 150μl 的2 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒后棄去,如此重復(fù)5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10 分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應(yīng)在加終止液后15 分鐘以內(nèi)進行。
用于檢測未知抗體的間接法:
用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過夜。次日洗滌3次。
↓
加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照)
↓
于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml, 37℃孵育30-60分鐘,洗滌,后一遍用DDW洗滌。
↓
加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。
↓
終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
↓
結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強,陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。
計算方法
以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD 值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。
注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間好控制在5 分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線,好做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD 值大于標準品孔第一孔的OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
配送服務(wù)
產(chǎn)品包裝:在采樣、發(fā)送、運輸過程中有保冷溫度要求的,公司均采用加厚款生物保溫箱,內(nèi)裝生物冰袋,有效的控制產(chǎn)品溫度,保證貨物質(zhì)量不受影響,同時并填充大量EPE發(fā)泡棉,具有優(yōu)越的緩沖彈性,它就像成千上萬的小彈簧緊緊地保護在郵寄物品周圍,它能有效的吸收嚴酷的沖擊力,使郵寄物品免于破損,保證貨物完好送達您手。
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