人抗蛋白酶3抗體IgG(PR3 Ab-IgG)ELISA試劑盒僅供研究使用。
詳細(xì)介紹
規(guī)格: 96T/48T
品牌:R&D BIM
種屬:人.大鼠.小鼠
檢測波長:450 nm
所需樣本體積: 50-100ul
適用范圍:僅供科研
保存及有效期:2-8℃，六個月，-20℃一年
檢測目的:用于測定血清，血漿及相關(guān)液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本。
供應(yīng)的種屬有：大象、牛、大鼠、小鼠、人、馬、兔、大熊貓、類人猿、蜥蜴、蝌蚪、菠菜、羊、犬、魷魚、蝸牛、扁豆、豌豆、馬鈴薯、蟈蟈、豚鼠、倉鼠、金黃地鼠、鵝、鴿子、禿鷲、河馬、犀牛、野豬、東北虎、斑鳩、蚯蚓、鯉魚、眼鏡蛇、青蛙、丹頂鶴、鳥類等動植物種屬
實驗原理
ELISA試劑盒實驗原理：用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或者標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗體、HRP標(biāo)記的親和素，經(jīng)過徹底洗滌后用底物顯色。底物在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品濃度呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定OD值，計算樣品濃度。
試劑盒組成
1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
2 酶標(biāo)試劑 6ml×1 瓶 8 標(biāo)準(zhǔn)品（
4800 pmol/L）
0.5ml×1 瓶
3 酶標(biāo)包被板 12 孔×8 條 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份
5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張
6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個
樣品類型
標(biāo)本必須為液體，不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血漿。每個標(biāo)本量收集體積＝100ul×檢測種類。取材前須向銷售人員索要說明書。
樣品采集
收集標(biāo)本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當(dāng)天進(jìn)行檢測的標(biāo)本，儲存在4℃?zhèn)溆�，如有特殊原因需要周期收集�?biāo)本，
試劑盒的優(yōu)點(diǎn)
·特點(diǎn)：
1、靈敏度：有二層含義，1)為試劑檢出被檢物質(zhì)的低量的能力；2)為試劑對大量樣品中陽性檢出的能力;2、特異性：常用交叉反應(yīng)率表示。含有與待測物相近結(jié)構(gòu)部份的物質(zhì)可能存在交叉反應(yīng)，使測定結(jié)果升高，可能導(dǎo)致假陽性，所以交叉反應(yīng)是評價其質(zhì)量的關(guān)鍵指標(biāo);
3、精密度：ELISA試劑一般指其批內(nèi)CV%，其值應(yīng)小于15%；定量試劑應(yīng)同時考察線性范圍;
4、準(zhǔn)確度：通過添加回收實驗進(jìn)行評價;
5、簡便性：指在不影響試劑的前三項指標(biāo)的前題下，實驗和測定步驟越少越好，在定性實驗中結(jié)果判斷簡單明了，定量試驗結(jié)果計算也應(yīng)簡單;
6、安全性：指試劑對操作者和環(huán)境安全無害無傳染性;
7、經(jīng)濟(jì)性：試劑在同等質(zhì)量條件下通過大規(guī)模生產(chǎn)或技術(shù)進(jìn)步降低成本，而市場價格比較合理;
8、試劑評價：需要有權(quán)威的確證方法和確證的樣品進(jìn)行檢測。
人抗蛋白酶3抗體IgG(PR3 Ab-IgG)ELISA試劑盒樣本信息問題解答
我能否在實驗開始前一天收集樣品？
◆ 除非試劑盒內(nèi)說明書特別說明不允許，一般都可以。如果收集的樣品不能夠及時進(jìn)行檢測，請保存至-20℃或者按照說明書進(jìn)行保存。應(yīng)避免反復(fù)凍融。
◆ -20℃是推薦的冷藏保存溫度。解凍的平衡過程可能會導(dǎo)致樣品的降解。
我是否必需按照試劑盒內(nèi)說明書中的方法準(zhǔn)備樣品？
◆ 推薦的樣品準(zhǔn)備方法是經(jīng)過實驗驗證的佳的方法，所以推薦按照說明書上的方法制備樣品。
我能否不用推薦的收集方法來收集血漿？
◆ 每一次按照推薦步驟操作的測定都是經(jīng)過驗證可行的。在某些測定中有些抗凝劑是不被推薦的。具體請參看說明書。
◆ 有些待檢測的分析物也存在于血小板中，因此，推薦使用低血小板血漿。正確的收集操作方法請參看說明書。
操作步驟
用于檢測未知抗體的間接法：
用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃過夜。次日洗滌3次。
↓
加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。（同時做空白、陰性及陽性孔對照）
↓
于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體（抗抗體）0.1ml， 37℃孵育30-60分鐘，洗滌,后一遍用DDW洗滌。
↓
加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
↓
終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
↓
結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。
計算方法
判定Elisa試劑盒結(jié)果計算
對于新入行不久，對ELISA的結(jié)果分析這塊不太熟悉。客戶的實驗是通過人源的蛋白作為抗原，兔源多克隆抗體作為一抗（我們就是為了通過做ELISA來檢測其效價），然后通過辣根過氧化物作為二抗及顯色組分。實驗做完了，但不知道怎么分析結(jié)果，例如標(biāo)準(zhǔn)曲線怎么做之類的。另外，還想問一下，有沒有實用的軟件可用來分析。對于客戶的問題回答：
間接ELISA要是試劑盒，會有標(biāo)準(zhǔn)品的，把標(biāo)準(zhǔn)品按一定濃度梯度稀釋一塊兒做（一般有三個重復(fù)），后酶標(biāo)儀或分光光度計比色，用軟件（oringe）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，的出公式，按公式將樣品帶入公式，
用于ELISA結(jié)果計算方便的是logit曲線。曲線的橫坐標(biāo)用標(biāo)樣各濃度（ng/ml 或其他單位）的自然對數(shù)表示，縱坐標(biāo)用各濃度顯色值的logit值表示。Logit值的計算方法如下：
B/B0 B
Logit（B/B0）=ln———— =ln————
1-B/B0 B0-B
其中B0是0ng/ml孔的顯色值，B是其它濃度的顯色值。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間好控制在5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD 值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
人抗蛋白酶3抗體IgG(PR3 Ab-IgG)ELISA試劑盒源自先進(jìn)酶聯(lián)免疫技術(shù)，涵蓋國內(nèi)外專家的經(jīng)驗與智慧。采用先進(jìn)的技術(shù)和設(shè)備，確保品質(zhì)的同時，降低成本，為更多有需要 的研究人員，節(jié)省實驗經(jīng)費(fèi)，保證實驗質(zhì)量，多家生物科研基地合作伙伴，實力團(tuán)隊傾力打造專注于elisa試劑盒的生產(chǎn)，研發(fā)，助力科研!
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