人抗心肌抗體(AMA)ELISA試劑盒僅供研究使用。
詳細(xì)介紹
規(guī)格: 96T/48T
品牌:R&D BIM
種屬:人.大鼠.小鼠
檢測波長:450 nm
所需樣本體積: 50-100ul
適用范圍:僅供科研
保存及有效期:2-8℃,六個(gè)月,-20℃一年
檢測目的:用于測定血清,血漿及相關(guān)液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本。
供應(yīng)的種屬有:大象、牛、大鼠、小鼠、人、馬、兔、大熊貓、類人猿、蜥蜴、蝌蚪、菠菜、羊、犬、魷魚、蝸牛、扁豆、豌豆、馬鈴薯、蟈蟈、豚鼠、倉鼠、金黃地鼠、鵝、鴿子、禿鷲、河馬、犀牛、野豬、東北虎、斑鳩、蚯蚓、鯉魚、眼鏡蛇、青蛙、丹頂鶴、鳥類等動(dòng)植物種屬
使用目的概述
酶聯(lián)免疫吸附測定(enzyme-linked immunosorbent assay 簡稱ELISA)是在免疫酶技術(shù)(immunoenzymatic techniques)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新型的免疫測定技術(shù),ELISA過程包括抗原(抗體)吸附在固相載體上稱為包被,加待測抗體(抗原), 再加相應(yīng)酶標(biāo)記抗體(抗原),生成抗原(抗體)--待測抗體(抗原)--酶標(biāo)記抗體的復(fù)合物,再與該酶的底物反應(yīng)生成有色產(chǎn)物。借助分光光度計(jì)的光吸收計(jì)算抗體(抗原)的量。待測抗體(抗原)的定量與有色產(chǎn)生成正比。
根據(jù)我司多年的研究經(jīng)驗(yàn)指出ELISA可以用來檢測血清樣本,看有還是沒有某個(gè)抗原或抗體,也可以看該抗原或抗體是多還是少,可以比較不同血清樣本之間該抗原/抗體的含量高低。
如果該抗原是一個(gè)病原,或該抗體是一個(gè)對(duì)某病原具有特異性的抗體,則ELISA檢測該抗原或該抗體的結(jié)果,可以用來幫助判斷,提供血清的個(gè)體,是否感染或曾經(jīng)感染過這個(gè)病原。
試劑盒組成
1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
2 酶標(biāo)試劑 6ml×1 瓶 8 標(biāo)準(zhǔn)品(
4800 pmol/L)
0.5ml×1 瓶
3 酶標(biāo)包被板 12 孔×8 條 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份
5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張
6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個(gè)
樣品類型
標(biāo)本必須為液體,不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血漿。每個(gè)標(biāo)本量收集體積=100ul×檢測種類。取材前須向銷售人員索要說明書。
樣品采集
收集標(biāo)本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對(duì)收集后當(dāng)天進(jìn)行檢測的標(biāo)本,儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆,如有特殊原因需要周期收集?biāo)本,
試劑盒的優(yōu)點(diǎn)
·特點(diǎn):
1、靈敏度:有二層含義,1)為試劑檢出被檢物質(zhì)的低量的能力;2)為試劑對(duì)大量樣品中陽性檢出的能力;2、特異性:常用交叉反應(yīng)率表示。含有與待測物相近結(jié)構(gòu)部份的物質(zhì)可能存在交叉反應(yīng),使測定結(jié)果升高,可能導(dǎo)致假陽性,所以交叉反應(yīng)是評(píng)價(jià)其質(zhì)量的關(guān)鍵指標(biāo);
3、精密度:ELISA試劑一般指其批內(nèi)CV%,其值應(yīng)小于15%;定量試劑應(yīng)同時(shí)考察線性范圍;
4、準(zhǔn)確度:通過添加回收實(shí)驗(yàn)進(jìn)行評(píng)價(jià);
5、簡便性:指在不影響試劑的前三項(xiàng)指標(biāo)的前題下,實(shí)驗(yàn)和測定步驟越少越好,在定性實(shí)驗(yàn)中結(jié)果判斷簡單明了,定量試驗(yàn)結(jié)果計(jì)算也應(yīng)簡單;
6、安全性:指試劑對(duì)操作者和環(huán)境安全無害無傳染性;
7、經(jīng)濟(jì)性:試劑在同等質(zhì)量條件下通過大規(guī)模生產(chǎn)或技術(shù)進(jìn)步降低成本,而市場價(jià)格比較合理;
8、試劑評(píng)價(jià):需要有權(quán)威的確證方法和確證的樣品進(jìn)行檢測。
人抗心肌抗體(AMA)ELISA試劑盒操作步驟
用于檢測未知抗體的間接法:
用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過夜。次日洗滌3次。
↓
加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌。(同時(shí)做空白、陰性及陽性孔對(duì)照)
↓
于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml, 37℃孵育30-60分鐘,洗滌,后一遍用DDW洗滌。
↓
加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。
↓
終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
↓
結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號(hào)表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽性。
計(jì)算方法
判定Elisa試劑盒結(jié)果計(jì)算
對(duì)于新入行不久,對(duì)ELISA的結(jié)果分析這塊不太熟悉?蛻舻膶(shí)驗(yàn)是通過人源的蛋白作為抗原,兔源多克隆抗體作為一抗(我們就是為了通過做ELISA來檢測其效價(jià)),然后通過辣根過氧化物作為二抗及顯色組分。實(shí)驗(yàn)做完了,但不知道怎么分析結(jié)果,例如標(biāo)準(zhǔn)曲線怎么做之類的。另外,還想問一下,有沒有實(shí)用的軟件可用來分析。對(duì)于客戶的問題回答:
間接ELISA要是試劑盒,會(huì)有標(biāo)準(zhǔn)品的,把標(biāo)準(zhǔn)品按一定濃度梯度稀釋一塊兒做(一般有三個(gè)重復(fù)),后酶標(biāo)儀或分光光度計(jì)比色,用軟件(oringe)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,的出公式,按公式將樣品帶入公式,
用于ELISA結(jié)果計(jì)算方便的是logit曲線。曲線的橫坐標(biāo)用標(biāo)樣各濃度(ng/ml 或其他單位)的自然對(duì)數(shù)表示,縱坐標(biāo)用各濃度顯色值的logit值表示。Logit值的計(jì)算方法如下:
B/B0 B
Logit(B/B0)=ln———— =ln————
1-B/B0 B0-B
其中B0是0ng/ml孔的顯色值,B是其它濃度的顯色值。
注意事項(xiàng)
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間好控制在5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請(qǐng)每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD 值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD 值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請(qǐng)避光保存。
7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
人抗心肌抗體(AMA)ELISA試劑盒源自先進(jìn)酶聯(lián)免疫技術(shù),涵蓋國內(nèi)外專家的經(jīng)驗(yàn)與智慧。采用先進(jìn)的技術(shù)和設(shè)備,確保品質(zhì)的同時(shí),降低成本,為更多有需要 的研究人員,節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi),保證實(shí)驗(yàn)質(zhì)量,多家生物科研基地合作伙伴,實(shí)力團(tuán)隊(duì)傾力打造專注于elisa試劑盒的生產(chǎn),研發(fā),助力科研!