背景資料 Serotonin (5-hydroxytryptamine, or 5-HT) is a monoamine neurotransmitter synthesised in serotonergic neurons in the central nervous system and enterochromaffin cells in the gastrointestinal tract. Serotonin plays an important part in the biochemistry of depression, migraine, bipolar disorder and anxiety. It is also believed to be influential on sexuality and appetite. 5-HT is generally thought not to be released from synaptic terminal buttons in the manner of classical neurotransmission but from serotonergic varacosities into the extra neuronal space. From here it is free to diffuse over a relatively large region of space (>20μm) and activate 5-HT receptors located on the dendrites, cell bodies and presynaptic terminals of adjacent neurons. Serotonergic action is terminated primarily via uptake of 5-HT from the synapse. This is through the specific monoamine transporter for 5-HT, 5-HT reuptake transporter, on the presynaptic neuron. The pharmacology of 5-HT is extremely complex, with its actions being mediated by a large and diverse range of 5-HT receptors.

一、怎樣選擇實(shí)驗(yàn)需要的抗體

1. 一抗選擇要點(diǎn)

（1）定體的名字注意中英文名字、它名、亞型等信息。
（2）確定你的實(shí)驗(yàn)類型，Elisa，WB，IHC，ICC，還是FACS。一般抗體的說(shuō)明書都會(huì)列出該抗體經(jīng)驗(yàn)證過(guò)適用于何種實(shí)驗(yàn)的類型，如果抗體說(shuō)明書沒有提及的應(yīng)用類型，并不意味著該抗體不適用于此種分析應(yīng)用類型，而僅是說(shuō)明尚未經(jīng)過(guò)此種實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，請(qǐng)根據(jù)說(shuō)明書列出的已驗(yàn)證的類型來(lái)選擇適合你實(shí)驗(yàn)的抗體。
（3）確定實(shí)驗(yàn)樣本的種屬，Human，Mouse，還是Rat。一般抗體說(shuō)明書都列出該抗體經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證過(guò)適用于何種物種實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)根據(jù)說(shuō)明書列出已驗(yàn)證的種屬來(lái)選擇適合你實(shí)驗(yàn)的抗體。
（4）樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)。了解樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)有助于選擇合適的抗體，待測(cè)樣本蛋白的結(jié)構(gòu)域和樣本在提取和處理過(guò)程中是否會(huì)變性，蛋白空間構(gòu)象的改變，會(huì)影響抗體的免疫親和反應(yīng)。
（5）單多克隆抗體的選擇。市面上的抗體還是以多克隆抗體為主，一般單克隆抗體特異性強(qiáng)，但親和力相對(duì)小，檢測(cè)抗原靈敏度相對(duì)就低；而多克隆抗體特異性稍弱，但抗體的親和力強(qiáng)，靈敏度高，但易出現(xiàn)非特異性染色（可以通過(guò)封閉等避免）。

2. 二抗選擇要點(diǎn)

（1）種屬來(lái)源。主要根據(jù)一抗種屬來(lái)源來(lái)決定購(gòu)買二抗來(lái)源，如一抗是小鼠來(lái)源，那二抗就買抗小鼠的即可（羊、兔等均可）。
（2）標(biāo)記物的選擇。有HRP、Biotin、熒光素等標(biāo)記物。一般SP三步法二抗選擇Biotin標(biāo)記的二抗，以與后面的SP結(jié)合反應(yīng)，而免疫熒光染色就需要購(gòu)買不同熒光素標(biāo)記的二抗，如羅丹明、FITC、Cy3等常用熒光素。

二、抗體的穩(wěn)定性
1. 抗體的穩(wěn)定性是自然界長(zhǎng)期進(jìn)化的結(jié)果。抗體是免疫系統(tǒng)中重要的分子之一，其穩(wěn)定性是自然進(jìn)化篩選的結(jié)果。在眾多物種中，抗體分子形成了保守而穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)。
2. 抗體分子的高Tm值。在室溫下，甚至短時(shí)間溫度達(dá)到50-60℃，抗體分子都能維持正確折疊，保持應(yīng)有的活性。
3. 抗體的純度。采用先進(jìn)的抗體純化技術(shù)，確�？贵w產(chǎn)品的高純度，保障其抗體產(chǎn)品的穩(wěn)定性。
4. 抗體的濃度。高濃度的抗體產(chǎn)品可減少容器表面吸附造成的物質(zhì)損失，高濃度的抗體穩(wěn)定性更好，抗體產(chǎn)品中93%的濃度大于0.5mg/ml。

三、抗體購(gòu)買渠道和品牌
國(guó)外著名抗體品牌的質(zhì)量一般沒問題，但價(jià)格較貴，而且很多抗體品牌本身不生產(chǎn)抗體，所以能找到abcam抗體生產(chǎn)商生產(chǎn)的原裝進(jìn)口抗體，隨著網(wǎng)絡(luò)技術(shù)的越來(lái)越普及，我們自己就可以通過(guò)國(guó)內(nèi)外的相關(guān)網(wǎng)站來(lái)檢索，歡迎點(diǎn)擊.國(guó)內(nèi)大的生物試劑查詢網(wǎng)站來(lái)查找您所需要的產(chǎn)品資料。

四、 5-羥色胺抗體的保存

抗體無(wú)論是保存還是運(yùn)輸都應(yīng)盡可能地避免反復(fù)凍融，收到抗體后請(qǐng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)的需要，對(duì)抗體進(jìn)行分裝，避免同一管抗體反復(fù)凍融（反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致抗體空間結(jié)構(gòu)變性，導(dǎo)致多聚體形成，從而降低抗體的結(jié)合能力）�？贵w保存得當(dāng)與否，直接決定了抗體的活性和使用效果，如果抗體保存得當(dāng)，抗體活性大部分都可以維持?jǐn)?shù)年。請(qǐng)謹(jǐn)記，無(wú)論何時(shí)請(qǐng)按照說(shuō)明書推薦的保存條件正確處理和保存抗體。

1. 收到抗體后，請(qǐng)務(wù)必在4℃，12000rpm，離心3分鐘，（無(wú)論是液體還是凍干粉狀態(tài)），再打開管蓋進(jìn)行分裝和保存（如果抗體體積小于50ul，請(qǐng)延長(zhǎng) 離心時(shí)間至5分鐘，以保證全部抗體均離心下來(lái)）。抗體一般使用特制的儲(chǔ)存管，只有在12000rpm離心3分鐘，才能將附著在管壁或蓋內(nèi)的抗體全部離心下來(lái)（即使是在10000rpm離心也會(huì)離心不完全，導(dǎo)致出現(xiàn)抗體的量不足的現(xiàn)象）。

2. 對(duì)于ProSci大部分抗體，比較合適的保存方式是，分裝后保存在-20℃或者-80℃。

（1）對(duì)絕大多數(shù)抗體來(lái)說(shuō)，保存在-20℃就完全足夠了，沒有任何證據(jù)顯示保存在-80℃會(huì)更好。
（2）分裝可以大程度的降低反復(fù)凍融對(duì)抗體活性的損害，同時(shí)也降低了由于多次從同一管中吸取抗體造成的污染可能性。
（3）分裝的量以一次實(shí)驗(yàn)用完為好，少不能少于10ul每份。因?yàn)榉盅b體積越小，抗體的濃度越可能會(huì)受到蒸發(fā)以及管壁吸附的影響。
（4）復(fù)融后的分裝抗體如果一次用不完，將剩余母液保存在4℃，避免再凍起來(lái)。
（5）抗體工作液應(yīng)該當(dāng)天配制當(dāng)天用完，4℃保存盡量不要超過(guò)1天。
（6）絕對(duì)避免將抗體保存在自動(dòng)除霜冰箱中，將抗體保存在冰箱里層，避免溫度變化造成反復(fù)凍融。
3. 大部分抗體收到后4℃短暫保存1~2周對(duì)抗體活性沒有影響。
4. 大部分抗體的運(yùn)輸條件：一般的運(yùn)輸過(guò)程需要1~2周的時(shí)間，所以是在低溫4℃的條件下來(lái)完成的。
4℃運(yùn)輸主要的目的是為了避免反復(fù)凍融對(duì)抗體活性的損害（如果使用干冰運(yùn)輸，那么收到時(shí)抗體是凍起來(lái)的，為了分裝就需要解凍，這就多了一次凍融的過(guò)程），所以運(yùn)輸過(guò)程中絕對(duì)避免干冰運(yùn)輸。