背景資料 This gene encodes a member of the lipoxygenase gene family and plays a dual role in the synthesis of leukotrienes from arachidonic acid. The encoded protein, which is expressed specifically in bone marrow-derived cells, catalyzes the conversion of arachidonic acid to 5(S)-hydroperoxy-6-trans-8,11,14-cis-eicosatetraenoic acid, and further to the allylic epoxide 5(S)-trans-7,9-trans-11,14-cis-eicosatetrenoic acid (leukotriene A4). Leukotrienes are important mediators of a number of inflammatory and allergic conditions. Mutations in the promoter region of this gene lead to a diminished response to antileukotriene drugs used in the treatment of asthma and may also be associated with atherosclerosis and several cancers. Alternatively spliced transcript variants encoding different isoforms have been found for this gene. [provided by RefSeq, Jan 2012]

一、怎樣選擇實驗需要的抗體

1. 一抗選擇要點

（1）定體的名字注意中英文名字、它名、亞型等信息。
（2）確定你的實驗類型，Elisa，WB，IHC，ICC，還是FACS。一般抗體的說明書都會列出該抗體經(jīng)驗證過適用于何種實驗的類型，如果抗體說明書沒有提及的應(yīng)用類型，并不意味著該抗體不適用于此種分析應(yīng)用類型，而僅是說明尚未經(jīng)過此種實驗驗證，請根據(jù)說明書列出的已驗證的類型來選擇適合你實驗的抗體。
（3）確定實驗樣本的種屬，Human，Mouse，還是Rat。一般抗體說明書都列出該抗體經(jīng)試驗驗證過適用于何種物種實驗，請根據(jù)說明書列出已驗證的種屬來選擇適合你實驗的抗體。
（4）樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)。了解樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)有助于選擇合適的抗體，待測樣本蛋白的結(jié)構(gòu)域和樣本在提取和處理過程中是否會變性，蛋白空間構(gòu)象的改變，會影響抗體的免疫親和反應(yīng)。
（5）單多克隆抗體的選擇。市面上的抗體還是以多克隆抗體為主，一般單克隆抗體特異性強，但親和力相對小，檢測抗原靈敏度相對就低；而多克隆抗體特異性稍弱，但抗體的親和力強，靈敏度高，但易出現(xiàn)非特異性染色（可以通過封閉等避免）。

2. 二抗選擇要點

（1）種屬來源。主要根據(jù)一抗種屬來源來決定購買二抗來源，如一抗是小鼠來源，那二抗就買抗小鼠的即可（羊、兔等均可）。
（2）標(biāo)記物的選擇。有HRP、Biotin、熒光素等標(biāo)記物。一般SP三步法二抗選擇Biotin標(biāo)記的二抗，以與后面的SP結(jié)合反應(yīng)，而免疫熒光染色就需要購買不同熒光素標(biāo)記的二抗，如羅丹明、FITC、Cy3等常用熒光素。

二、抗體的穩(wěn)定性
1. 抗體的穩(wěn)定性是自然界長期進化的結(jié)果。抗體是免疫系統(tǒng)中重要的分子之一，其穩(wěn)定性是自然進化篩選的結(jié)果。在眾多物種中，抗體分子形成了保守而穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)。
2. 抗體分子的高Tm值。在室溫下，甚至短時間溫度達到50-60℃，抗體分子都能維持正確折疊，保持應(yīng)有的活性。
3. 抗體的純度。采用先進的抗體純化技術(shù)，確�？贵w產(chǎn)品的高純度，保障其抗體產(chǎn)品的穩(wěn)定性。
4. 抗體的濃度。高濃度的抗體產(chǎn)品可減少容器表面吸附造成的物質(zhì)損失，高濃度的抗體穩(wěn)定性更好，抗體產(chǎn)品中93%的濃度大于0.5mg/ml。

三、抗體購買渠道和品牌
國外著名抗體品牌的質(zhì)量一般沒問題，但價格較貴，而且很多抗體品牌本身不生產(chǎn)抗體，所以能找到abcam抗體生產(chǎn)商生產(chǎn)的原裝進口抗體，隨著網(wǎng)絡(luò)技術(shù)的越來越普及，我們自己就可以通過國內(nèi)外的相關(guān)網(wǎng)站來檢索，歡迎點擊.國內(nèi)大的生物試劑查詢網(wǎng)站來查找您所需要的產(chǎn)品資料。

四、 5-脂氧合酶抗體的保存

抗體無論是保存還是運輸都應(yīng)盡可能地避免反復(fù)凍融，收到抗體后請根據(jù)實驗的需要，對抗體進行分裝，避免同一管抗體反復(fù)凍融（反復(fù)凍融會導(dǎo)致抗體空間結(jié)構(gòu)變性，導(dǎo)致多聚體形成，從而降低抗體的結(jié)合能力）。抗體保存得當(dāng)與否，直接決定了抗體的活性和使用效果，如果抗體保存得當(dāng)，抗體活性大部分都可以維持數(shù)年。請謹記，無論何時請按照說明書推薦的保存條件正確處理和保存抗體。

1. 收到抗體后，請務(wù)必在4℃，12000rpm，離心3分鐘，（無論是液體還是凍干粉狀態(tài)），再打開管蓋進行分裝和保存（如果抗體體積小于50ul，請延長離心時間至5分鐘，以保證全部抗體均離心下來）�？贵w一般使用特制的儲存管，只有在12000rpm離心3分鐘，才能將附著在管壁或蓋內(nèi)的抗體全部離心下來（即使是在10000rpm離心也會離心不完全，導(dǎo)致出現(xiàn)抗體的量不足的現(xiàn)象）。

2. 對于ProSci大部分抗體，比較合適的保存方式是，分裝后保存在-20℃或者-80℃。

（1）對絕大多數(shù)抗體來說，保存在-20℃就完全足夠了，沒有任何證據(jù)顯示保存在-80℃會更好。
（2）分裝可以大程度的降低反復(fù)凍融對抗體活性的損害，同時也降低了由于多次從同一管中吸取抗體造成的污染可能性。
（3）分裝的量以一次實驗用完為好，少不能少于10ul每份。因為分裝體積越小，抗體的濃度越可能會受到蒸發(fā)以及管壁吸附的影響。
（4）復(fù)融后的分裝抗體如果一次用不完，將剩余母液保存在4℃，避免再凍起來。
（5）抗體工作液應(yīng)該當(dāng)天配制當(dāng)天用完，4℃保存盡量不要超過1天。
（6）絕對避免將抗體保存在自動除霜冰箱中，將抗體保存在冰箱里層，避免溫度變化造成反復(fù)凍融。
3. 大部分抗體收到后4℃短暫保存1~2周對抗體活性沒有影響。
4. 大部分抗體的運輸條件：一般的運輸過程需要1~2周的時間，所以是在低溫4℃的條件下來完成的。
4℃運輸主要的目的是為了避免反復(fù)凍融對抗體活性的損害（如果使用干冰運輸，那么收到時抗體是凍起來的，為了分裝就需要解凍，這就多了一次凍融的過程），所以運輸過程中絕對避免干冰運輸。