檢測波長:450 nm
所需樣本體積: 50-100ul
適用范圍:僅供科研
保存及有效期:2-8℃，六個月，-20℃一年
檢測目的:用于測定血清，血漿及相關液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標本。
供應的種屬有：大象、牛、大鼠、小鼠、人、馬、兔、大熊貓、類人猿、蜥蜴、蝌蚪、菠菜、羊、犬、魷魚、蝸牛、扁豆、豌豆、馬鈴薯、蟈蟈、豚鼠、倉鼠、金黃地鼠、鵝、鴿子、禿鷲、河馬、犀牛、野豬、東北虎、斑鳩、蚯蚓、鯉魚、眼鏡蛇、青蛙、丹頂鶴、鳥類等動植物種屬

使用目的概述

酶聯(lián)免疫吸附測定（enzyme-linked immunosorbent assay 簡稱ELISA）是在免疫酶技術(shù)（immunoenzymatic techniques）的基礎上發(fā)展起來的一種新型的免疫測定技術(shù),ELISA過程包括抗原（抗體）吸附在固相載體上稱為包被，加待測抗體（抗原）, 再加相應酶標記抗體（抗原）,生成抗原（抗體）--待測抗體（抗原）--酶標記抗體的復合物，再與該酶的底物反應生成有色產(chǎn)物。借助分光光度計的光吸收計算抗體（抗原）的量。待測抗體（抗原）的定量與有色產(chǎn)生成正比。

根據(jù)我司多年的研究經(jīng)驗指出ELISA可以用來檢測血清樣本，看有還是沒有某個抗原或抗體，也可以看該抗原或抗體是多還是少，可以比較不同血清樣本之間該抗原/抗體的含量高低。

如果該抗原是一個病原，或該抗體是一個對某病原具有特異性的抗體，則ELISA檢測該抗原或該抗體的結(jié)果，可以用來幫助判斷，提供血清的個體，是否感染或曾經(jīng)感染過這個病原。

試劑盒組成

1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶

2 酶標試劑 6ml×1 瓶 8 標準品（

4800 pmol/L）

0.5ml×1 瓶

3 酶標包被板 12 孔×8 條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶

4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份

5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張

6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個

樣品類型

　標本必須為液體，不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血漿。每個標本量收集體積＝100ul×檢測種類。取材前須向銷售人員索要說明書。

樣品采集

　收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當天進行檢測的標本，儲存在4℃?zhèn)溆�，如有特殊原因需要周期收集標本�?/span>

試劑盒的優(yōu)點

·特點：
1、靈敏度：有二層含義，1)為試劑檢出被檢物質(zhì)的低量的能力；2)為試劑對大量樣品中陽性檢出的能力;

2、特異性：常用交叉反應率表示。含有與待測物相近結(jié)構(gòu)部份的物質(zhì)可能存在交叉反應，使測定結(jié)果升高，可能導致假陽性，所以交叉反應是評價其質(zhì)量的關鍵指標;

3、精密度：ELISA試劑一般指其批內(nèi)CV%，其值應小于15%；定量試劑應同時考察線性范圍;

4、準確度：通過添加回收實驗進行評價;

5、簡便性：指在不影響試劑的前三項指標的前題下，實驗和測定步驟越少越好，在定性實驗中結(jié)果判斷簡單明了，定量試驗結(jié)果計算也應簡單;

6、安全性：指試劑對操作者和環(huán)境安全無害無傳染性;

7、經(jīng)濟性：試劑在同等質(zhì)量條件下通過大規(guī)模生產(chǎn)或技術(shù)進步降低成本，而市場價格比較合理;

8、試劑評價：需要有權(quán)威的確證方法和確證的樣品進行檢測。

Human Amylin ELISA KIT操作步驟

用于檢測未知抗體的間接法：

用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃過夜。次日洗滌3次。

　　↓ 　　

加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。（同時做空白、陰性及陽性孔對照）

　　↓ 　　

于反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體（抗抗體）0.1ml，　　37℃孵育30-60分鐘，洗滌,后一遍用DDW洗滌。

　　↓

加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。

↓

終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。

↓

結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。

計算方法

判定Elisa試劑盒結(jié)果計算

對于新入行不久，對ELISA的結(jié)果分析這塊不太熟悉。客戶的實驗是通過人源的蛋白作為抗原，兔源多克隆抗體作為一抗（我們就是為了通過做ELISA來檢測其效價），然后通過辣根過氧化物作為二抗及顯色組分。實驗做完了，但不知道怎么分析結(jié)果，例如標準曲線怎么做之類的。另外，還想問一下，有沒有實用的軟件可用來分析。對于客戶的問題回答：

間接ELISA要是試劑盒，會有標準品的，把標準品按一定濃度梯度稀釋一塊兒做（一般有三個重復），后酶標儀或分光光度計比色，用軟件（oringe）繪制標準曲線，的出公式，按公式將樣品帶入公式，

用于ELISA結(jié)果計算方便的是logit曲線。曲線的橫坐標用標樣各濃度（ng/ml 或其他單位）的自然對數(shù)表示，縱坐標用各濃度顯色值的logit值表示。Logit值的計算方法如下：

B/B0 B

Logit（B/B0）=ln———— =ln————

1-B/B0 B0-B

其中B0是0ng/ml孔的顯色值，B是其它濃度的顯色值。

注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。

3．各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間好控制在5 分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4．請每次測定的同時做標準曲線，好做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD 值大于標準品孔第一孔的OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用。

Human Amylin ELISA KIT源自先進酶聯(lián)免疫技術(shù)，涵蓋國內(nèi)外專家的經(jīng)驗與智慧。采用先進的技術(shù)和設備，確保品質(zhì)的同時，降低成本，為更多有需要的研究人員，節(jié)省實驗經(jīng)費，保證實驗質(zhì)量，多家生物科研基地合作伙伴，實力團隊傾力打造專注于elisa試劑盒的生產(chǎn)，研發(fā)，助力科研!