ELISA試劑盒實驗原理：用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗體的微孔中依次加入標本或者標準品、生物素化的抗體、HRP標記的親和素，經(jīng)過徹底洗滌后用底物顯色。底物在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品濃度呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定OD值，計算樣品濃度。

二、樣品類型：

　標本必須為液體，不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血漿。每個標本量收集體積＝100ul×檢測種類。取材前須向銷售人員索要說明書。

樣品采集：

　收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當天進行檢測的標本，儲存在4℃?zhèn)溆�，如有特殊原因需要周期收集標本�?/font>

　將標本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反復凍融。標本2-8℃可保存48小時，-20℃可保存1個月。-70度可保存6個月。

三、人尿游離皮質(zhì)醇(UFC)ELISA試劑盒技術流程

雙抗體夾心法(檢測未知抗原)

間接法(檢測未知抗體)

1、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次。
2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應孔中，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌(同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔)。
3、加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.05ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。
4、加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
5、終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml
6、結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。

1、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1-10ug/ml，每孔加0.1ml，4℃過夜。次日洗滌3次。
2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.05ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照)
3、加酶標抗體：于反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.05ml，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,后一遍用DDW洗滌。
4、加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
5、終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml
6、結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。

四、客戶須知

1仔細閱讀說明書

　　2確定試劑盒在有效期內(nèi)

　　3按說明書確定所有試劑齊全(數(shù)量、體積)

　　4標本制備要規(guī)范，每份標本體積要按2-3個復孔以上的量制備(貯存)，盡量分裝做備份。短期內(nèi)無法實驗者，注意低溫保存

　　5準備好所有實驗額外所需物品，如試管、吸頭、移液器、離心機等

　　6根據(jù)檢測標本數(shù)量確定所需試劑的量

　　7按說明書將所用試劑平衡至室溫，配制所需試劑

五、報告內(nèi)容及標準

1、ELISA標準曲線；

2、詳細的實驗步驟；

3、完整的實驗報告（試劑耗材，實驗方法，實驗結(jié)果及結(jié)果說明）；

4、實驗進行階段，我公司客服人員會及時向您匯報實驗進程。

不斷提升服務質(zhì)量，精益求精，“真誠的服務”是我司永恒的主題。

六、標本處理

1、只對試劑盒本身負責，不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負責，請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量，預留充足的樣本。

2、實驗前應預測標本含量，如果標本濃度過高，應對標本進行稀釋，使稀釋后的標本符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應的稀釋倍數(shù)。

3、若所檢樣本不包含在說明書所列樣本之中，建議進行預實驗驗證其有效性，并注意留存樣本。

4、使用化學裂解液制備的組織勻漿或細胞提取液可能會由于某些化學物質(zhì)的引入導致 ELISA實驗結(jié)果偏差。

5、若樣本為細胞培養(yǎng)上清，因該類樣本干擾因素較多，如：細胞狀態(tài)、細胞數(shù)量、采樣時間等，所以可能存在檢測不出的情況。

6、某些天然蛋白或重組蛋白，包括原核及真核重組蛋白，可能因為與本產(chǎn)品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配，而不被檢測出。

7、建議使用新鮮樣本，保存時間過長可能會存在蛋白降解或變性導致實驗結(jié)果偏差。

溫馨提示：由于關稅及產(chǎn)品促銷活動性，請來電咨詢具體產(chǎn)品折扣。

七、產(chǎn)品優(yōu)勢

1、簡便快捷：450nm酶標儀檢測，包含Elisa所需全部試劑和詳細操作說明，全部現(xiàn)貨。
2、品質(zhì)卓越：原料精選國際知名品牌，經(jīng)嚴格甄選，保障各批次批間穩(wěn)定性和可重復性。
3、權威認可：已有超過380篇SCI文獻引用，兩次登上頂級期刊Nature。
4、品種齊全：提供近200種常用試劑盒，能檢測人、大鼠、小鼠、猴和牛等多種屬。
5、暢銷全球：出口到歐美市場，受到全球科學家的關注。
6、使用廣泛：客戶遍及全國各地，包括中科院、北京生命科學研究院、北京大學、清華大學、復旦大學、華西醫(yī)科大學、北京師范大學、華中科技大學等著名高校及研究機構。