酶聯(lián)免疫吸附測定法( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay, ELISA )于1971年由Engvall和Perlmann創(chuàng)建成功，成為繼免疫熒光和放射免疫之后又一具有重大意義和深遠(yuǎn)影響的免疫技術(shù)。該技術(shù)利用蛋白和聚苯乙烯表面疏水吸附的特性，將抗原-抗體特異性反應(yīng)固定于固相載體表面進(jìn)行，同時結(jié)合酶對底物的高效催化作用而產(chǎn)生高靈敏度的實驗技術(shù)。由于酶的高效生物催化作用，一個酶分子在數(shù)分鐘內(nèi)可以催化幾十或幾百個底物分子發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生了放大效應(yīng)，使得原來微乎其微的抗原或抗體在數(shù)分鐘后就可被檢測出來，因此可成功應(yīng)用于標(biāo)本中微量物質(zhì)含量的測定。

樣品收集、處理及保存方法

1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

3. 細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

1. 酶標(biāo)儀（450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

人血管舒緩激肽(BK)ELISA試劑盒 操作注意事項

1. 試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶，這屬于正�，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。

2. 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

3. 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液即可視為陰性對照或者空白；預(yù)處理后的樣本無需稀釋，直接取10μL加樣即可。

4. 嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

5. 所有液體組分使用前充分搖勻。

試劑盒組成

名稱	96孔配置	48孔配置	備注
微孔酶標(biāo)板	12孔×8條	12孔×4條	無
標(biāo)準(zhǔn)品（80 pg/ml）	0.6mL	0.6mL	按說明書進(jìn)行稀釋
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液	6mL	3mL	無
樣本稀釋液	6mL	3mL	無
檢測抗體-HRP	10mL	5mL	無
20×洗滌緩沖液	25mL	15mL	按說明書進(jìn)行稀釋
底物A	6mL	3mL	無
底物B	6mL	3mL	無
終止液	6mL	3mL	無
封板膜	2張	2張	無
說明書	1份	1份	無
自封袋	1個	1個	無

注：標(biāo)準(zhǔn)品用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液依次稀釋為：80、40、20、10、5、2.5 pg/ml

試劑的準(zhǔn)備

20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法

1. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。

2. 自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

操作步驟

1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

3. 待測樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；

4. 隨后標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7. 每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

試劑盒說明

1. 在儲存及孵育過程中避免將試劑暴露在強光中。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發(fā)和污染，試劑避免受到微生物的污染，因為蛋白水解酶的干擾將導(dǎo)致出現(xiàn)錯誤的結(jié)果。

2. 小心吸取試劑并嚴(yán)格遵守給定的孵育時間和溫度。請注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時，第一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導(dǎo)致不同的 “預(yù)孵育”時間，從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。而且，洗滌不充分將影響試驗結(jié)果。

3. 試劑盒保存：部分試劑保存于-20℃，部分試劑保存于2-8℃，具體以標(biāo)簽上的標(biāo)示為準(zhǔn)。

4. 濃洗滌液會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。

5. 剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì)，此為正�，F(xiàn)象，不會對實驗結(jié)果造成任何影響。

6. 中、英文說明書可能會有不一致之處，請以英文說明書為準(zhǔn)。

7. 所有的樣品都應(yīng)管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。

8. 有效期：6個月

結(jié)果判斷

繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。

產(chǎn)品特點：

極高品質(zhì)—高品質(zhì)的抗體和試劑是ELISA試劑盒的基礎(chǔ)

精確特異—特異檢測目標(biāo)分子，結(jié)果精確可重復(fù)

高度靈敏—可檢測到pg/mL級別的目標(biāo)

種類齊全—可覆蓋人、大鼠、小鼠、棉鼠、獼猴、豬、馬、犬和貓等多個種屬

實力保障—實驗標(biāo)準(zhǔn)曲線完美、超強特異性、高靈敏度等優(yōu)點

優(yōu)化設(shè)計—可拆卸式96孔板(12X8)，為血清、血漿、尿樣和細(xì)胞培養(yǎng)物樣本檢測進(jìn)行優(yōu)化

搜索人血管舒緩激肽(BK)ELISA試劑盒操作辦法：

方法1、在產(chǎn)品名稱框中輸入您要查詢的產(chǎn)品名稱，點擊[搜索 search]即可。您可以不用輸入精確的全稱，本系統(tǒng)具有通配查詢功能，相關(guān)的產(chǎn)品都可以搜索出來，輸入更少的字反而可以讓您獲得更多的信息。

方法2、查詢生物試劑時，在產(chǎn)品名稱里輸入CAS號均可點擊[搜索 search]即可。您同樣可以搜索更具體的產(chǎn)品信息。

方法3、我司所有產(chǎn)品下方均有留言框，你只需把你要的產(chǎn)品名稱及聯(lián)系方式留言框內(nèi)提交，業(yè)務(wù)員將在半個工作日內(nèi)給予你回復(fù)。

方法4、公司網(wǎng)站均設(shè)有在線咨詢，及聯(lián)系方式，你可通過電話，QQ，郵箱等方式進(jìn)行產(chǎn)品咨詢，（由于公司產(chǎn)品眾多，系統(tǒng)無法提交更多產(chǎn)品資訊，聯(lián)系我司業(yè)務(wù)員可獲得產(chǎn)品價格，說明書，質(zhì)檢報告等

特別提醒：
1.取樣和存樣所用的凍存管、離心管、吸頭等需高溫滅菌處理；
2.所有存樣管口需以封口膜封好；
3.所有樣品管壁需要用防水記號筆清晰標(biāo)明編號（便于區(qū)分即可）；
4.所有樣品避免反復(fù)凍融
5.如有特別要求，請與服務(wù)該區(qū)域的銷售經(jīng)理講明。
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