檢測(cè)波長(zhǎng):450 nm
所需樣本體積: 50-100ul
適用范圍:僅供科研
保存及有效期:2-8℃，六個(gè)月，-20℃一年
檢測(cè)目的:用于測(cè)定血清，血漿及相關(guān)液體等樣本。例如適合檢測(cè)包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本。
供應(yīng)的種屬有：大象、牛、大鼠、小鼠、人、馬、兔、大熊貓、類人猿、蜥蜴、蝌蚪、菠菜、羊、犬、魷魚(yú)、蝸牛、扁豆、豌豆、馬鈴薯、蟈蟈、豚鼠、倉(cāng)鼠、金黃地鼠、鵝、鴿子、禿鷲、河馬、犀牛、野豬、東北虎、斑鳩、蚯蚓、鯉魚(yú)、眼鏡蛇、青蛙、丹頂鶴、鳥(niǎo)類等動(dòng)植物種屬

實(shí)驗(yàn)原理

ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理：用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或者標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗體、HRP標(biāo)記的親和素，經(jīng)過(guò)徹底洗滌后用底物顯色。底物在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品濃度呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定OD值，計(jì)算樣品濃度。

試劑盒組成

1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶

2 酶標(biāo)試劑 6ml×1 瓶 8 標(biāo)準(zhǔn)品（

4800 pmol/L）

0.5ml×1 瓶

3 酶標(biāo)包被板 12 孔×8 條 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1 瓶

4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說(shuō)明書(shū) 1 份

5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張

6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個(gè)

樣品類型

　標(biāo)本必須為液體，不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血漿。每個(gè)標(biāo)本量收集體積＝100ul×檢測(cè)種類。取材前須向銷售人員索要說(shuō)明書(shū)。

樣品采集

　收集標(biāo)本前必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定。對(duì)收集后當(dāng)天進(jìn)行檢測(cè)的標(biāo)本，儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆茫缬刑厥庠蛐枰芷谑占瘶?biāo)本，

試劑盒的優(yōu)點(diǎn)

·特點(diǎn)：
1、靈敏度：有二層含義，1)為試劑檢出被檢物質(zhì)的低量的能力；2)為試劑對(duì)大量樣品中陽(yáng)性檢出的能力;

2、特異性：常用交叉反應(yīng)率表示。含有與待測(cè)物相近結(jié)構(gòu)部份的物質(zhì)可能存在交叉反應(yīng)，使測(cè)定結(jié)果升高，可能導(dǎo)致假陽(yáng)性，所以交叉反應(yīng)是評(píng)價(jià)其質(zhì)量的關(guān)鍵指標(biāo);

3、精密度：ELISA試劑一般指其批內(nèi)CV%，其值應(yīng)小于15%；定量試劑應(yīng)同時(shí)考察線性范圍;

4、準(zhǔn)確度：通過(guò)添加回收實(shí)驗(yàn)進(jìn)行評(píng)價(jià);

5、簡(jiǎn)便性：指在不影響試劑的前三項(xiàng)指標(biāo)的前題下，實(shí)驗(yàn)和測(cè)定步驟越少越好，在定性實(shí)驗(yàn)中結(jié)果判斷簡(jiǎn)單明了，定量試驗(yàn)結(jié)果計(jì)算也應(yīng)簡(jiǎn)單;

6、安全性：指試劑對(duì)操作者和環(huán)境安全無(wú)害無(wú)傳染性;

7、經(jīng)濟(jì)性：試劑在同等質(zhì)量條件下通過(guò)大規(guī)模生產(chǎn)或技術(shù)進(jìn)步降低成本，而市場(chǎng)價(jià)格比較合理;

8、試劑評(píng)價(jià)：需要有權(quán)威的確證方法和確證的樣品進(jìn)行檢測(cè)。

人轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白(TTR)ELISA試劑盒 樣本信息問(wèn)題解答

我能否在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前一天收集樣品？

◆ 除非試劑盒內(nèi)說(shuō)明書(shū)特別說(shuō)明不允許，一般都可以。如果收集的樣品不能夠及時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，請(qǐng)保存至-20℃或者按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行保存。應(yīng)避免反復(fù)凍融。

◆ -20℃是推薦的冷藏保存溫度。解凍的平衡過(guò)程可能會(huì)導(dǎo)致樣品的降解。

我是否必需按照試劑盒內(nèi)說(shuō)明書(shū)中的方法準(zhǔn)備樣品？

◆ 推薦的樣品準(zhǔn)備方法是經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證的佳的方法，所以推薦按照說(shuō)明書(shū)上的方法制備樣品。

我能否不用推薦的收集方法來(lái)收集血漿？

◆ 每一次按照推薦步驟操作的測(cè)定都是經(jīng)過(guò)驗(yàn)證可行的。在某些測(cè)定中有些抗凝劑是不被推薦的。具體請(qǐng)參看說(shuō)明書(shū)。

◆ 有些待檢測(cè)的分析物也存在于血小板中，因此，推薦使用低血小板血漿。正確的收集操作方法請(qǐng)參看說(shuō)明書(shū)。

操作步驟

用于檢測(cè)未知抗體的間接法：

用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃過(guò)夜。次日洗滌3次。

　　↓ 　　

加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌。（同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照）

　　↓ 　　

于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體（抗抗體）0.1ml，　　37℃孵育30-60分鐘，洗滌,后一遍用DDW洗滌。

　　↓

加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。

↓

終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。

↓

結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性。

計(jì)算方法

判定Elisa試劑盒結(jié)果計(jì)算

對(duì)于新入行不久，對(duì)ELISA的結(jié)果分析這塊不太熟悉�？蛻舻膶�(shí)驗(yàn)是通過(guò)人源的蛋白作為抗原，兔源多克隆抗體作為一抗（我們就是為了通過(guò)做ELISA來(lái)檢測(cè)其效價(jià)），然后通過(guò)辣根過(guò)氧化物作為二抗及顯色組分。實(shí)驗(yàn)做完了，但不知道怎么分析結(jié)果，例如標(biāo)準(zhǔn)曲線怎么做之類的。另外，還想問(wèn)一下，有沒(méi)有實(shí)用的軟件可用來(lái)分析。對(duì)于客戶的問(wèn)題回答：

間接ELISA要是試劑盒，會(huì)有標(biāo)準(zhǔn)品的，把標(biāo)準(zhǔn)品按一定濃度梯度稀釋一塊兒做（一般有三個(gè)重復(fù)），后酶標(biāo)儀或分光光度計(jì)比色，用軟件（oringe）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，的出公式，按公式將樣品帶入公式，

用于ELISA結(jié)果計(jì)算方便的是logit曲線。曲線的橫坐標(biāo)用標(biāo)樣各濃度（ng/ml 或其他單位）的自然對(duì)數(shù)表示，縱坐標(biāo)用各濃度顯色值的logit值表示。Logit值的計(jì)算方法如下：

B/B0 B

Logit（B/B0）=ln———— =ln————

1-B/B0 B0-B

其中B0是0ng/ml孔的顯色值，B是其它濃度的顯色值。

注意事項(xiàng)

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間好控制在5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4．請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD 值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD 值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請(qǐng)避光保存。

7．嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9．本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

人轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白(TTR)ELISA試劑盒 源自先進(jìn)酶聯(lián)免疫技術(shù)，涵蓋國(guó)內(nèi)外專家的經(jīng)驗(yàn)與智慧。采用先進(jìn)的技術(shù)和設(shè)備，確保品質(zhì)的同時(shí)，降低成本，為更多有需要的研究人員，節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)，保證實(shí)驗(yàn)質(zhì)量，多家生物科研基地合作伙伴，實(shí)力團(tuán)隊(duì)傾力打造專注于elisa試劑盒的生產(chǎn)，研發(fā)，助力科研!